Modification site-sélective et supportée d'anticorps pour l'introduction de fonctions click à la demande : vers des immuno-conjugués finement contrôlés – ClickAb

La forte affinité des anticorps pour leur antigène en font un outil de choix pour la vectorisation de principes actifs (PA) dans le cadre d'applications diagnostiques et/ou thérapeutiques ciblées. A ce titre, le développement de méthodes de greffage de PA a connu un véritable essor depuis les années 2000, afin de générer les "conjugués PA-anticorps" correspondants. Parmi les axes de développement de ces méthodes de modification, le nombre de PA greffés par anticorps et leur localisation sur l'anticorps sont cruciaux car ils influencent l'effet thérapeutique/diagnostique, la pharmacodynamique, la solubilité et la stabilité des conjugués générés. La répétabilité du processus de greffage et donc l'homogénéité des conjugués obtenus sont également des critères clefs pour l'exploitation des conjugués d'anticorps à l'échelle clinique.
Plusieurs méthodes chimiques de "modification site-sélective" d'anticorps ont été développées au cours des dernières années. Mais les premières (acylation de lysines ou alkylation de thiols en solution) généraient des problèmes d'homogénéité ou de stabilité. Des méthodes de "rebridging" en solution permettent de réduire puis reconnecter les ponts disulfures d'un anticorps tout en y introduisant un PA, ou une fonction de chimie click qui permet une fonctionnalisation en deux étapes. Mais ces méthodes offrent un choix restreint concernant le nombre de PA greffés par anticorps (généralement 2 ou 4).
Dans ce projet, une méthode de rebridging adaptée sur support solide permettra l'immobilisation d'un anticorps, la modification d'un seul de ses 4 ponts disulfures pour y introduire une fonction de chimie click (grâce à un effet de pseudo-dilution de l'agent de rebridging dû à son ancrage sur support solide), puis sa libération du support. L'anticorps "mono-clickable" généré pourra ensuite être engagé soit en réaction click pour générer un conjugué PA-anticorps avec un seul PA par anticorps ; soit dans 1 à 3 nouveaux cycles de rebridging avant réaction click, permettant d'avoir un parfait contrôle du nombre de PA greffés (1, 2, 3 ou 4) , y compris différents entre eux.
Cette méthode de "mono-modification site-sélective itérative" sera également évaluée dans une approche d'acylation d'une protéine modèle (SUMO).