Outils pour Étudier les N-Glycanes Paucimannose, C-Mannose et O-Mannose dans les Leucocytes Humains – PetitGly

Chez les animaux, on peut distinguer trois types de glycanes liés aux protéines et se terminant par un mannose. Le C-mannose et le O-mannose sont constitués d'un seul résidu de mannose directement lié à la protéine, tandis que les N-glycanes peuvent comporter jusqu'à neuf mannoses liées à la protéine par deux résidus de N-acétylglucosamine. Les N-glycanes comportant jusqu'à trois mannoses sont appelés paucimannoses. Ils sont formés par la dégradation enzymatique des N-glycanes d´origine et se trouvent généralement sur les protéines lysosomales. Certains types de cellules, en particulier les neutrophiles et les monocytes, possèdent des organelles semblables à des lysosomes, appelés granules, qui contiennent également des protéines portant des paucimannoses. Ces protéines sont sécrétées ou délivrées dans les phagosomes pour combattre les infections. Les neutrophiles sont les globules blancs les plus abondants chez l'homme et constituent la première ligne de défense contre les agents pathogènes. Les mannoses jouent divers rôles dans les interactions hôte-pathogène et la réponse immunologique, mais le rôle exact des paucimannoses n'est pas connu. À l'heure actuelle, on ne connait qu´ un nombre limité de protéines abondantes qui portent des N-glycanes paucimannose (par exemple, la myéloperoxydase) ou des C-mannoses (comme les facteurs du complément).

Dans des travaux antérieurs, nous avons identifié les lectines bactériennes BC2L-A et FimH, qui se lient au mannose, comme des outils utiles pour étudier les glycanes mannosylés. BCL2-A a été utilisée pour enrichir et identifier de nouvelles protéines C- et O-mannosylées, tandis que FimH a permis la cristallisation d'une protéine, dans laquelle la densité électronique des paucimannoses était clairement visible. Nous souhaitons maintenant utiliser ces lectines pour identifier les protéines portant des N-glycans de type paucimannose dans les neutrophiles et les monocytes. Pour cela, nous avons établi un protocole qui élimine les peptides avec des glycanes de type oligomannose mais laisse les paucimannoses intacts. Les peptides paucimannosidiques peuvent alorsêtre capturés par les lectines et analysés par spectrométrie de masse en même temps que les peptides O- et C-mannosylés. Par ailleurs, nous appliquerons la co-cristallisation des lectines avec l'azurocidine, qui est l'une des principales protéines portant des paucimannoses sécrétées par les neutrophiles, et déterminerons l'importance du paucimannose pour l'élimination des bactéries. BC2L-A et FimH seront comparés quant à leur capacité à capturer les glycopeptides de C-mannose, O-mannose et paucimannose afin de développer des méthodes permettant d'isoler plus distinctement ces types de glycanes.