Rôle de la traduction et de RPS6 dans la mégacaryopoïèse et la thrombopénie liée à ETV6 – TRIM

Les mutations germinales du gène ETV6, un facteur de transcription clé dans l’hématopoïèse, sont responsables d’une thrombopénie et entraine un risque accru de développer une hémopathie maligne. Bien que les études menées jusqu’à présent aient fourni des informations importantes sur le rôle joué par ETV6 dans la mégacaryopoïèse et la formation des plaquettes, les mécanismes moléculaires qui sous-tendent cette maladie ne sont pas connus. Dans notre première étude sur l'impact des variants ETV6 sur la mégacaryopoïèse, la formation et la fonction plaquettaire, nous avons observé une augmentation de la prolifération des précurseurs des plaquettes, un défaut de leur ploïdisation et des anomalies dans le cytosquelette des plaquettes, suggérant une implication de la réorganisation du cytosquelette dans l'altération de la production de plaquettes. Nos récents travaux d’analyse du transcriptome à l’échelle cellulaire mettent évidence une augmentation de la traduction dans les mégacaryocytes (MK) porteurs de variants ETV6 par rapport aux cellules contrôles. A l’inverse, la voie de réparation de l’ADN est diminuée.
Nous émettons l’hypothèse que les variants d’ETV6 induisent une dysrégulation au niveau de la traduction et affecte l'expression des protéines ribosomales (en particulier RPS6) lors de la mégacaryopoïèse, entraînant des défauts dans la maturation des mégacaryocytes et la formation de proplaquettes. Étant donné le rôle des protéines ribosomales dans la régulation de l'intégrité génomique, des niveaux élevés de RPS6 pourraient également participer à la prédisposition à la leucémie chez les porteurs de variants d'ETV6.
Le projet proposé vise à étudier le rôle de la régulation de la traduction et plus particulièrement le rôle de la protéine ribosomale RPS6 dans la mégacaryopoïèse normale et déficiente en ETV6. Pour tester notre hypothèse, le projet TRIM sera divisé en 3 packages de travail :
1) Analyser la traduction globale et les niveaux de RPS (RPS6) au cours de la mégacaryopoïèse en utilisant des approches de séquençage à haut débit et de cytométrie de flux,
2) Examiner l'impact de RPS6 et de sa phosphorylation dans la mégacaryopoïèse et la formation des plaquettes. Le rôle fonctionnel de RPS6 sera étudié en modulant son expression/phosphorylation par des approches génétiques et pharmacologiques, in vitro et in vivo. Les conséquences sur la formation des MK et des plaquettes seront étudiés.
3) Evaluer les lésions de l’ADN et les voies de réparation dans les cellules mutées pour ETV6. Nous évaluerons le lien entre les niveaux élevés de RPS6 et les dommages de l’ADN.
Notre projet est un travail collaboratif impliquant trois partenaires académiques complémentaires reconnus dans les domaines des troubles plaquettaires, du rôle des ribosomes dans la régulation de la traduction, ainsi que dans l'étude de la réparation de l'ADN et des troubles sanguins. Le coordinateur du projet maîtrise toutes les méthodes de biologie cellulaire nécessaires à la bonne exécution du projet. Les partenaires possèdent tous les outils nécessaires à la réalisation du projet.
Le programme TRIM permettra d'acquérir une connaissance approfondie des mécanismes de la thrombopénie liée à ETV6 en mettant l'accent sur la traduction et la régulation des protéines ribosomales. Les approches proposées conduiront à l'identification de nouvelles cibles pour restaurer la production de plaquettes. Enfin, nous acquerrons une compréhension globale du rôle de la régulation de la traduction et plus particulièrement de l'implication des protéines ribosomales RPS6 dans la production de plaquettes qui, bien que suspectées, n'ont jamais été étudiées auparavant. Ces résultats seront essentiels en biologie fondamentale pour mieux comprendre le rôle de la régulation de la traduction et seront d'intérêt au-delà du domaine de ETV6/mégacaryopoïèse.