Diagnostic multiplexé de microARN en utilisant la détection FRET ultrasensible et homogène – amplify

Le projet amplify vise le développement et l'application d'un nouvel outil de diagnostic permettant une détection plus rapide et plus efficace des biomarqueurs du cancer - des microARN (miARN). La technologie combinera la sensibilité ultra-haute et le multiplexage de plusieurs miRNA différents dans un format d'essai en une étape et de détection rapide et homogène. La détection de miARN circulant (plasma) et d’hybridation in-situ des miARN au niveau cellulaire (cellules, tissus) et dans les cellules vivantes sera démontrée. Le bénéfice direct pour le diagnostic du cancer sera mis en évidence sur des échantillons cliniques de patients atteints de cancer et des individus en bonne santé et les résultats seront comparés à l'état de l'art des technologies de détection miARN. Amplify développera trois sujets majeurs : i) détection homogène des miARN endogènes dans le plasma très spécifique (distinction des mésappariements de paires de bases simples) et très sensible (sub-femtomolaire) ; ii) détection multiplexée de miARN endogènes à partir d'un seul échantillon de plasma ; iii) imagerie d'hybridation in-situ de miARN multiplexée de niveau supérieur.
Le concept de recherche d’amplify est de combiner la puissance de l'amplification d'acide nucléique isotherme pour une détection ultra-sensible avec la polyvalence de FRET pour la biosensibilité optique multiplexée et homogène (sans séparation). La quantification directe de plusieurs miARN différents à partir d'un seul échantillon de plasma humain, sans étapes laborieuses de préparation et de séparation et le besoin d'un équipement et d'une analyse sophistiqués, a le potentiel d'un changement de paradigme dans le diagnostic clinique du miARN car il combine la simplicité d'un immunodosage, la capacité de multiplexage des microarrays, la sensibilité de qRT-PCR et la capacité de détection en haut débit du séquençage de nouvelle génération au sein d'un seul outil de diagnostic. La mise en œuvre de la même technologie dans l'hybridation in situ dans les cellules et les tissus présentera une percée scientifique dans la détection multiplexée, qui est actuellement limitée à environ trois couleurs.