Mécanismes moléculaires responsables de la pathogénicité, induits par le virus de la fièvre de la vallée du Rift dans les cellules cibles . Analyse du rôle de la protéine non structurale NSs et de ses interactions avec l'hôte – PATHRIFT

Le virus de la fièvre de la vallée du Rif (VFVR) est un arbovirus émergent (Bunyaviridae, Phlebovirus) transmis par les moustiques et endémique en Afrique sub-saharienne et en Egypte. En 2000, le virus s'est propagé pour la première fois dans la péninsule Arabique. Depuis, les flambées dévastatrices n'ont fait qu'augmenter. Le VFVR est responsable de maladies graves comme l'hépatite hémorragique mortelle chez l'homme et une forte mortalité et des avortements chez les ruminants.
La protéine nonstructurale NSs, facteur principal de virulence, s'accumule dans le noyau où elle polymérise et forme des filaments en désorganisant la distribution de plusieurs protéines cellulaires du noyau, impliquées dans la régulation de la transcription. Dans ce projet, nous analyserons l'impact de la formation des filaments de NSs sur l'établissement de la pathogénicité, en particulier sur la capacité du filament à interagir avec les protéines et les séquences régulatrices du génome de l'hôte.
Le projet pose la question: Par quels mécanismes la protéine NSs du VFVR induit-elle un désordre cellulaire? Pour y répondre, nous aborderons les aspects suivants:
1. Identifier les sequences d'ADN interagissant avec le filamanent de NSs à différents stades de l'infection dans les cellules cibles (hépatocytes et macrophages) par la technique du ChIP-on chip (immunoprecipitation de la chromatine par anticorps anti-NSs hybridé sur des puces Affymetrix contenant soit le genome murin complet ou celles qui contiennent plus de 28 000 promoteurs de génes murins
2. Analyser les mécanismes de reprogrammation transcriptionnelle de la cellule dans lequel TFIIH et les récepteurs nucléaires sont impliqués
3. Analyser l'effet de l'infection du VFVR sur la regulation des cascades de cytokines déclenchant une réponse inflammatoire. L'expression des cytokines sera analysée dans le serum de souris infectées et les surnageants de macrophages murins infectés à l'aide de kit détectant la presence simultanée de plusieurs cytokines.
NSs interagit avec plusieurs SOCS protéines (suppresseur de la voie de signalisation des cytokines). Les principales étapes de la voie Jak-Stat ciblées par les SOCS seront analysées dans l'infection par le VFVR virulent et recombinant n'interagissnt plus avec les SOCS.
4. Comprendre la formation du filament dans le noyau des cellules infectées. On analysera par immunofluence, microscopie confocale et reconstruction tridimensionnelle, la présence des partenaires cellulaires de NSs. Pour évaluer leur rôle dans la formation du filament on construira des VFVR recombiants dont la NSs interagit plus avec ses partenaires
1 : déterminer les genes de l'hôte régulés par NSs et analyser leur rôle dans la pathogénicité.
2. Déterminer comment RVFV affecte la transcription regulée par les récepteurs nucléaires et TFIIH
3 : Déterminer le profil d'expression des cytokines RVFV infection et les effets de NSs sur kes voies de signalisation régulées par les SOCS proteines.
4 : Determiner le role des partenaires de NSs sur la formation du filament.
Le travail precedent a conduit à la construction d'un virus recombinant non pathogène qui peut etre utilisé comme vaccin. Cependant il n'existe aucun traitement thérateupique adapté à la FVR. Une meilleure ccompréhension des relations pathogéne-hôte permettra de developer de telles strategies.