– TAT1/SLC26A8

La protéine TAT1 (Testis anion transporter 1)/SLC26A8 est un transporteur anionique spécifiquement exprimé dans les cellules germinales mâles et fortement apparenté par sa structure à la famille des transporteurs anioniques SLC26 dont plusieurs membres sont la cible de mutations perte de fonction pathogènes chez l'homme. TAT1 possède in vitro une activité de transporteur pour les anions sulfate et chlorure. Nous venons de démontrer que l'inactivation du gène Tat1 par recombinaison homologue chez la souris, induit comme seul phénotype observable une stérilité des mâles KO homozygotes, liée à une anomalie de structure du flagelle et à une perte totale de la mobilité des spermatozoïdes. Ce tableau « clinique » est une phénocopie du KO de la Septine 4, protéine impliquée dans la formation de l'annulus, une structure fibrillaire faisant la jonction entre les pièces principale et intermédiare du flagelle, où nous avons également mis en évidence la présence de la protéine Tat1. - Notre projet vise maintenant à élucider les mécanismes moléculaires de ces anomalies et en particulier à évaluer le rôle de l'activité de transport d'anions de Tat1 dans la différenciation terminale du spermatozoide; dans ce but, nous cherchons à sélectionner in vitro des mutants ponctuels de Tat1 ayant perdu leur activité de transport d'anions mais conservant une expression et un adressage membranaire de type sauvage. Ces mutants seront utilisés in vivo chez la souris dans des stratégies de knock in . Par ailleurs, nous rechercherons, notamment parmi les constituants de l'annulus (septines), des partenaires moléculaires et possibles régulateurs de la protéine Tat1. Nous envisageons de tester l'interaction de Tat1 avec la protéine Sept4 mais également de développer une recherche globale des partenaires de Tat1 dans les cellules germinales mâles par les approches de double hybride et analyse d'immunoprécipité Tat1 par spectrométrie de masse. - Compte tenu de l'expression exclusive du transporteur TAT1 dans la lignée germinale mâle, chez l'homme comme chez la souris, nous envisageons également de rechercher des mutations perte de fonction du gène TAT1 chez des patients consultant pour infertilité et présentant des défauts flagellaires et/ou une asthénozoospermie. Cette étude sera menée par immunodétection de la protéine TAT1 sur des frottis de spermatozoïdes et par analyse du gène TAT1 par les méthodes classiques de recherche de mutations ; elle sera par la suite éventuellement étendue à l'analyse de partenaires de TAT1. - Finalement, du fait de sa localisation à la membrane plasmique, Tat1 pourrait servir de cible pharmacologique pour le développement de molécules à visée contraceptive masculine. Pour cela, nous avons engagé une collaboration permettant de rechercher des inhibiteurs spécifiques de l'activité Tat1. - ...