Contribution des différentes voies d'activation des plaquettes sanguines dans des modèles murins de thrombose sur plaque d'athérosclérose. – TAPA

Malgré des progrès importants dans la compréhension de la physiopathologie des thromboses, les maladies ischémiques restent la première cause de morbi-mortalité dans les pays développés. De nombreux modèles animaux ont démontré le rôle clef des plaquettes sanguines lors des thromboses artérielles et l'on connaît assez bien les mécanismes de l'activation plaquettaire au contact d'une brèche d'une paroi vasculaire saine. En revanche, on connaît beaucoup moins bien les mécanismes mis en jeu au contact d'une plaque d'athérome érodée ou rompue, qui expose au sang circulant un matériel hétérogène contenant de nombreux activateurs de plaquettes. Le but du projet est de mettre au point des modèles de thrombose artérielle sur des plaques d'athérome chez la souris. Ils permettront d'identifier les voies d'activation préférentiellement engagées dans ce contexte afin de dégager les cibles pharmacologiques les plus pertinentes pour des thérapeutiques antithrombotiques efficaces et innovantes.
Ce projet comporte trois axes: la mise au point de modèles de thrombose sur plaque d'athérome, l'évaluation de leur sensibilité aux antiplaquettaires usuels, la mise en évidence de nouvelles voies d'activation et l'évaluation de leur contribution dans ce contexte.
i) Les souris invalidées pour l'apolipoprotéine E ou pour le récepteur des LDL seront utilisées. Les plaques seront développées spontanément ou bien leur localisation sera déterminée par la pose d'un collier. La thrombose sera déclenchée par lésion mécanique ou par laser. La thrombose sera observée en temps réel par microscopie intravitale à l'aide d'un microscope de dernière génération (MacroFluoTM) couplé à un système vidéo. On observera aussi les thromboses chez des souris dont les plaques auront rompues spontanément. Dans ce cas, les vaisseaux de ces souris seront examinés par des techniques d'histologie et de microscopie électronique. Pour tous ces types de thromboses, des paramètres quantitatifs (taille, durée, stabilité) et qualitatifs (marqueurs d'activation) seront déterminés.
ii) Ces différents modèles seront comparés aux modèles existants quant à leur sensibilité aux antiplaquettaires usuels, comme l'aspirine, le clopidogrel, un anti-GPIIbIIIa. Ils permettront de réévaluer les contributions respectives des voies du thromboxane A2, du récepteur P2Y12 de l'ADP et de la voie finale de l'activation plaquettaire, la GPIIbIIIa. L'hirudine permettra d'évaluer le rôle de la génération de thrombine.
iii) De nombreuses voies d'activation des plaquettes ont été identifiées ces dernières années : des récepteurs (GPVI du collagène, GPIb-IX-V du facteur de Willebrand, récepteurs de chimiokines, de lipides comme le LPA, P2Y1 de l'ADP) ou des protéines de transduction (PI-3 kinases, PLCg2, Gaq). Pour ces différentes voies, des souris déficientes existent. Leur moelle osseuse sera greffée aux souris qui présentent des plaques d'athérome afin d'étudier la réponse thrombotique selon les paramètres décrits.
Cette étude devrait permettre une meilleure compréhension des mécanismes moléculaires et cellulaires impliqués dans la formation des thromboses dans des conditions d'athérosclérose. En particulier, elle permettra de dégager les voies préférentiellement impliquées dans la formation d'une thrombose sur plaque d'athérome par rapport à une thrombose dans un vaisseau sain. Les voies qui apparaîtront les plus importantes, représenteront les cibles préférentielles pour des thérapeutiques antithrombotiques efficaces et innovantes. Enfin, cette étude permettra de fournir de nouveaux modèles murins de thrombose pour le criblage de nouvelles substances pharmacologiques.