Inflammasome et arthrose – INFLAMMASOME AND AO

RESUME PROJET – Contexte scientifique et objectifs: La découverte d'un traitement efficace de l'arthrose représente un enjeu majeur pour la prochaine décennie. L'arthrose se caractérise par la perte progressive du cartilage articulaire et un épaississement de l'os sous-chondral. Les cytokines proinflammatoires, en particulier l'IL-1 jouent un rôle essentiel dans l'arthrose. Récemment, la découverte de l' inflammasome pourrait expliquer la sécrétion intensive d'IL-1 observée durant la dégradation cartilagineuse. L'inflammasome est un complexe multiproteique, responsable de l'activation des caspases et conduisant à la sécrétion d' IL-1. Les NALPs sont les protéines centrales du complexe. L'ASC, autre composant essentiel, relie les NALPs à la caspase 1. Des mutations dans le gène NALP3 sont responsables de maladies inflammatoires.
Objectifs: étudier l'expression des différents composants de l'inflammasome (dans os, cartilage), décrypter la régulation du gène NALP3, comprendre le rôle de l'inflammasome dans la destructruction articulaireRESUME PROJET – Description: A partir de différents modèles de culture, culture primaire de chondrocytes et ostéoblastes humains normaux et arthrosiques, explants de cartilage costaux de souris et chondrocyte articulaire de souris (de souris sauvage ou de souris génétiquement modifiée (souris KO invalidées pour NALP-3, ASC ou caspase-1), nous étudierons l'expression des différents composants de l'inflammasome à la fois dans le cartilage et l'os. Nous appliquerons deux types différents de stimuli (stimulation par l'IL-1 et compression) et analyserons par RT-PCR quantitative, western-blot et immunohistologie l'expression en ARNm et en protéine des NALPs, d'ASC et de la caspase-1. Nous décrypterons ensuite la régulation du gène NALP-3, en clonant le promoteur humain NALP-3 et analyserons la fonction de ce promoteur par analyse de CAT, bandshift et expériences de ChIP. Enfin, nous évaluerons le rôle de l'inflammasome dans la destruction articulaire en utilisant différentes stratégies pour inhiber l'inflammasome (le siRNA, les souris KO et un modèle in vivo de souris arthrosique, modèle utilisant la section de ligament et la meniscectomie du genou). Puis, nous mesurerons la production de PGE2, les expressions de cyclooxygenases et de prostaglandine E synthases ainsi que les expressions de MMP-1, -3 -13.RESUME PROJET – Resultats attendus: Bien qu' IL-1 soit la cytokine la plus connue et la plus puissante impliquée dans la dégradation articulaire durant l'arthrose, les premières tentatives afin de contrecarrer son effet (utilisation d'IL-1RA) n'ont pas été très concluantes. Une meilleure compréhension de la relation entre le processus de sécrétion d'IL-1 et l'arthrose en physiopathologie devrait être utile pour définir de meilleures cibles thérapeutiques.