Analyse fonctionnelle et moléculaire de l'activation des cellules humaines plasmocytoïdes pré-dendritiques (pDC) par des ligands de TLR9 – pDCtoll9

RESUME PROJET – Contexte scientifique et objectifs
Les cellules plasmocytoïdes pré-dendritiques (pDC) expriment le Toll-like receptor TLR9 qui est spécifique de séquences d'ADN de pathogènes. Les pDC constituent un lien très important entre l'immunité innée et l'immunité adaptative. Ceci semble être du en partie à leur fantastique capacité à produire des interférons de type I en réponse à leur activation par des ligands de TLR. Cette activation induit leur différenciation en cellules dendritiques et la capacité de stimuler des lymphocytes T. Notre projet a pour but de disséquer les mécanismes moléculaires contrôlant leurs fonctions de cellules productrices d'interférons et de cellules présentatrices dans l'immunité adaptative.
RESUME PROJET – Description
Notre projet s'articule en 3 parties qui se nourrissent les unes les autres et seront donc menées en parallèle.
1. Analyse moléculaire du recrutement de TLR9 et de son ligand au niveau des endosomes
Nous produirons des anticorps recombinants pour suivre le transport intracellulaire de TLR9 en employant une technique in vitro et rapide que nous avons récemment mise au point. La réalisation de cribles phénotypiques à haut débit nous permettra d'identifier des protéines impliquées dans le transport de TLR9 du réticulum endoplasmique (RE) vers les endosomes. Ces données seront croisées avec celles obtenues par analyse transcriptionnelle globale de pDC stimulées par des ligands de TLR. Quelques candidats sélectionnés seront analysés notamment par interférence d'ARN dans des études dynamiques sur le transport de TLR9 et de ses ligands vers les endosomes.

2. Analyse des conséquences de l'activation des pDC par la voie TLR9 sur le RE et la voie endosomale et sur la redistribution des molécules du CMH
Pour mieux comprendre le rôle biologique des pDC, nous cherchons à décrire de façon précise les bouleversements induits au niveau ultra-structural après activation des pDC via TLR9. Pour cela nous employons un ensemble de techniques (notamment immuno-microscopie électronique, déconvolution 3D) pour aussi étudier en fonction du temps après activation des pDC humaines fraîchement purifiées, le comportement de TLR9, de ses ligands et des molécules du CMH.

3. Analyse des capacités de présentation antigénique des pDC après activation via TLR9
En employant notamment un test mis au point au laboratoire, nous comparerons la capacité de pDC et de mDC purifiées à partir de même donneur à «cross présenter »un peptide long par leurs molécules de classe I du CMH. De plus, nous avons produit un anticorps recombinant spécifique des complexes classe I-peptide ainsi générés qui nous permettra de suivre l'apparition éventuelle de tels complexes dans les deux types de cellules.

RESUME PROJET – Resultats attendus
Nos travaux apporteront des informations sur la machinerie cellulaire impliquée dans le transport entre RE et les endosomes. Ce transport semble important à la fois pour la signalisation via les TLRs mais aussi pour la présentation d'antigènes exogènes. L'évaluation précise des capacités de présentation d'antigènes des pDC permettra de mieux concevoir des protocoles d'immunothérapies. De nombreux ligands de TLR sont actuellement à l'essai dans des pathologies allant des hépatites aux cancers. L'analyse des mécanismes moléculaires de l'activation des pDC peut conduire à l'identification de nouvelles cibles thérapeutiques pour augmenter (dans le cas du HIV ou de cancers) ou inhiber (pour des pathologies autoimmunes) la fonction des pDC.