– RNPASSEMBLY

Les particules RNP non-codantes sont à la base de nombreuses fonctions cellulaires fondamentales, comme la traduction, l'épissage, la biogenèse des ribosomes et d'autres ARN non-codant, et la réplication des télomères. Des études récentes ont montré que la formation de ces particules RNP était un processus très complexe, et qui nécessitait de nombreux facteurs d'assemblage. Par exemple, le ribosome contient environ 100 protéines, mais il utilise pas moins de 150 facteurs pour son assemblage. On pense que ces facteurs seraient importants pour faciliter l'assemblage de la particule, mais aussi pour exercer un contrôle strict sur la qualité des particules produites. La famille des protéines L7Ae est un ensemble de protéines partageant un domaine de liaison à l'ARN similaire. Ces protéines sont à la base de plusieurs types de particules RNP, et elles sont impliquées dans de nombreuses fonctions essentielles. Elles sont présentes dans les sous-unités ribosomales (traduction), dans les snoRNP à boites C/D et H/ACA (biogenèse des ribosomes), dans le snRNP U4 (épissage), et dans les mRNP codant pour les sélénoprotéines (traduction). La famille L7Ae possède un certain nombre de caractéristiques uniques: (i) elle participe à la construction de plusieurs RNP essentielles, (ii) ses membres forment une brique initiale au cours de la construction de ces RNP, et (iii) un membre donné peut participer à la formation de plusieurs types de RNP. La famille L7Ae constitue donc un modèle de choix pour l'étude de l'assemblage des RNP. Un assemblage correct des particules RNP est essentiel à leur fonction. Il est donc critique de comprendre comment ces particules sont formées dans la cellule. Notre projet porte précisément sur l'assemblage des particules RNP, à la fois au niveau biochimique et au niveau cellulaire. Notre projet est focalisé sur une protéine, Nufip (Rsa1 dans la levure), pour laquelle nos données montrent qu'elle est un facteur d'assemblage des particules de la famille L7Ae. Nous essaierons de démontrer que Rsa1/Nufip fait partie d'une machinerie conservée et destinée à l'assemblage des particules de la famille L7Ae, un peu à la manière du complexe SMN, qui fonctionne dans l'assemblage des particules Sm et LSm. En effet, nos données préliminaires montrent que Nufip/Rsa1 interagit avec la protéine Snu13/15.5kD (du snRNP U4 et des snoRNP à boites C/D); avec Nhp2 (de la télomérase et des snoRNA à boite H/ACA); et avec SBP2 (des mRNP codant les sélénoprotéines). Cependant, Rsa1/Nufip ne fait pas partie de ces particules, mais elle interagit avec elles de manière transitoire au cours de leur assemblage. De plus, nos données montrent que Rsa1/Nufip n'agit pas seule, mais au sein d'un complexe conservé au cours de l'évolution. Spécifiquement, nos objectifs sont de: 1-Caractériser la machinerie dont fait partie Nufip/Rsa1, par des approches de protéomique et de double-hybride. 2-Obtenir des informations structurales sur l'interaction L7Ae/Rsa1 (ou L7Ae/Nufip), par des approches de cristallisation, RMN et biochimiques. Nous ajouterons progressivement les autres composants de la machinerie d'assemblage dont fait partie Nufip/Rsa1. 3-Déterminer le rôle de Rsa1/Nufip dans un système d'assemblage in vitro de particules RNP L7Ae. 4-Déterminer le rôle de Rsa1/Nufip in vivo, par des approches de génétique et de biologie moléculaire. Nous nous intéresserons aux snoRNA à boite C/D, à la télomérase, ainsi qu'aux mRNP codant pour les sélénoprotéines. Nous considèrerons également les complexes RNP autres que ceux contenant des protéines de la famille L7Ae, et notamment les mRNP ayant FMRP. 5-Analyser les liens éventuels entre la machinerie Rsa1/Nufip et le complexe SMN, qui est l'autre système majeur d'assemblage des RNP dans la cellule. Notre projet apportera un certain nombre de connaissances fondamentales dans la biologie de l'ARN. Etant donné l'importance de la famille L7Ae et la nouveauté de notre hypothèse, notre projet devrait avoir un fort imp