– RCMCCD

Le remaniement du réseau actine-myosine est impliquée dans les changements de forme cellulaire accompagnant la cytocinèse, la migration, l'invasion de cellules tumorales, et la morphogenèse. La phosphorylation et déphosphorylation des chaînes légères régulatrices (RLCs) de la myosine sont les façons principales de réguler l'activité de la myosine. Les remaniements des deux réseaux cytosquelettiques qui accompagnent l'entrée et la sortie de la mitose (comme l'assemblage-désassemblage du fuseau et de l'anneau contractile) doivent être soigneusement coordonnés dans l'espace et dans le temps. Cependant, les mécanismes responsables de cette coordination sont mal connus. - - L'embryon de la drosophile est un system quasi idéal pour mieux comprendre ces questions. Les premières 13 divisions mitotiques synchrones ont lieu dans un même cytoplasme (un syncytium). Le cytoplasme peut être manipulé, soit par des outils génétiques de la drosophile, soit par microinjection de drogues. En suivant la dynamique de la myosine-GFP dans les embryons précoces vivants, nous avons découvert des oscillations de la myosine corticale en coordination avec les cycles mitotiques. Elle est recrutée à la fin de chaque télophase, et est dispersée au début de chaque prometaphase. Chaque recrutement de la myosine s'accompagne d'une contraction du cortex qui provoque un flux de cytoplasme interne et le mouvement des noyaux vers les pôles, essentiel au bon développement de l'embryon. Nous avons montré que ces cycles de recrutement-dispersion de la myosine sont entraînés par les cycles d'activation-inactivation de p34/cdc2 kinase à chaque cycle mitotique. L'activité mitotique de Cdc2 suffit à empêcher le recrutement cortical de la myosine, et son inactivation suffit à promouvoir son recrutement. Cependant cette régulation est indirecte: elle module, par une voie inconnue, l'activité de Rho kinase, qui est elle-même requise pour la phosphorylation et le recrutement cortical de la myosine. Plus surprenante, la voie de signalisation passe par les centrosomes: l'absence d'un composant centrosomique empêche les cycles de recrutement de la myosine. - - Le projet vise à mieux comprendre ces cycles de remaniements cytosquelettiques et la voie de signalisation qui les entraîne. Les objectifs de ce projet sont: 1) Identifier les composants de la voie de signalisation qui activent et éteignent la myosine corticale à chaque cycle mitotique; 2) Situer dans cette voie l'activité inhibitrice de la kinase Cdc2; 3) Elucider le rôle des centrosomes dans la voie d'activation de la myosine corticale. - - Nous allons aborder ces questions par des approches de génétique (analyse de mutations de la drosophile, expression de transgènes mutés, etc.), et de biologie cellulaire (microinjection de drogues, immunomarquage), mais surtout, en utilisant les techniques d'analyse in vivo grâce à la vidéo microscopie couplée avec l'expression de protéines marquées par la GFP ou d'autres sondes fluorescentes. -