Immuno-essais par déplacement de fluorescence pour la découverte d'anticorps anti-GPCR à haut débit: vers une meilleure compréhension des récepteurs adrénergiques dans le coeur. – DSIRE_GPCR_Ab

Les Récepteurs Couplés aux Protéines G (RCPG) sont les acteurs centraux du ballet des signaux moléculaires échangés par les cellules. Elles agissent de concert en s’activant et s’influençant mutuellement en fonction du contexte ou de la pathologie dans une trame complexe dont les figures et les significations restent, aujourd’hui encore, souvent indéchiffrables. L’étude de ces phénomènes est rendue difficile par le manque d’outils permettant de pointer et de moduler très précisément l’une de ces protéines parmi de nombreuses semblables. Bien que très attendu, le développement de tels outils se heurte à la difficulté d’identifier parmi pléthore de candidats inefficaces les rares qui posséderont une forte affinité et une grande sélectivité pour cette seule protéine. Dans ce projet nous proposons une approche combinant les méthodes avancées de productions d’anticorps contre ces cibles élusives et la mesure, une a une sur des millions de cellules, de l’affinité des anticorps sécrétés pour la protéine intègre purifiée dans son environnement membranaire. Cette mesure précise est rendue possible par l’utilisation de technologies micro fluidiques qui combinées à une chimie biocompatible permet la formation de millions de microcapsules dont la surface sert de capteur. Ces capteurs permettent de mesurer finement les interactions protéine-anticorps à une vitesse de milliers d’évènements par seconde. Les meilleurs anticorps sont triés et les clones correspondants récupérés vivants. Dans un second temps une mesure de sélectivité entre plusieurs cibles sera directement intégrée au critère de tri afin d’atteindre directement les très rares anticorps spécifiques. Les candidats issus du criblage seront produits à grande échelle et validés par des mesures biophysiques. Ils seront utilisés pour décrypter l’implications des récepteurs adrénergiques ß1 et ß2, les cibles utilisées lors du criblage, dans les phénomènes d’insuffisance cardiaque.