Une approche de chimie/biologie pour des analogues innovants de la granulysine – GRAN

La granulysine (GN) est une protéine humaine sécrétée par les lymphocytes T et les cellules NK. La protéine GN a une activité antimicrobienne assez large (bactéries Gram positif et négatif, champignons, parasites) ainsi que des propriétés immunomodulatrices. Grâce à l’expertise du coordinateur (O. Melnyk, CIIL, équipe CBF, Lille) en synthèse chimique des protéines et en biochimie, et celle de M. Pichavant (CIIL, équipe Li3, Lille) en immunologie pulmonaire, nous voulons réaliser une étude de relation structure-activité pour la protéine GN et progresser dans le mécanisme d’action de cette protéine en identifiant le ou les récepteurs impliqués dans ses activités. Les analogues de la GN ayant une forte activité et une meilleure stabilité seront testés dans un modèle murin d’infections pulmonaire par trois bactéries différentes.
L’utilisation de la synthèse chimique dans ce projet est justifiée par la grande difficulté rencontrée dans la production de cette protéine cytotoxique par les techniques recombinantes classiques. De plus, des contradictions dans la littérature sont dues probablement à l’hétérogénéité des protéines d’origine biologique et notamment à leur contamination potentielle par des éléments issus du système d’expression. Les protéines synthétiques sont dépourvues de tels contaminants. Ce projet repose sur des résultats préliminaires robustes obtenus à partir de protéine GN de haute pureté produite par synthèse chimique. En effet, un procédé efficace et modulaire a été validé pour la production de la protéine GN à l’échelle du milligramme. Le repliement de la protéine GN est maitrisé. Nous avons déterminé pour la première fois la nature des ponts disulfure formés durant le repliement. La protéine GN est active au bas nanomolaire dans un test de chimiotaxie utilisant des lymphocytes purifiés. Ce travail constitue donc une base solide et rationnelle pour la conception d’analogues optimisés.