Determination des fonctions de CTL2 dans la thrombose – CLINT

Les thromboses veineuses (TV), représentent la troisième cause de mortalité cardiovasculaire. Grâce à l'approche "Genome-Wide Association Study" (GWAS) notre laboratoire a récemment identifié SLC44A2 comme étant un nouveau gène de susceptibilité à la TV, les porteurs de l'isoforme Arg154 (HNA-3a) étant associés à un risque accru. Ce gène n'a pas de lien établi avec la thrombose ou la fibrinolyse, ce qui la rend particulièrement originale. SLC44A2 code pour la protéine membranaire "choline transporter-like protein 2" (CTL2), une protéine qui n'a été que peu étudiée mais qui a été associée avec le syndrome respiratoire aigu post-transfusionnel (TRALI), un processus qui implique les neutrophiles et une isoforme particulière de CTL-2 portant l'épitoge HNA-3a. Durant le TRALI, des allo-anticorps vont réagir avec l'arginine 154 (également appelé antigène HNA-3a) mais pas avec la glutamine 154 correspondant dans ce cas à l'antigène HNA-3b. L'interaction directe des allo-anticorps anti HNA-3a avec les neutrophiles porteurs de l'antigène va résulter en l'activation et à la destruction de l'endothelium pulmonaire médiée par les neutrophiles. Nous pensons que le modèle du TRALI peut même si il est différent de la physiopathologie de la TV "montrer la voie" afin de mieux comprendre pourquoi SLC44A2 joue un rôle dans la TV et pourquoi les porteurs de l'allèle codant pour HNA-3a ont un risque accru de développer une TV.
Nous caractériserons le rôle de SLC44A2 dans la physiopathologie de la TV via une étude fonctionnelle poussée. Au vue du nombre croissant d'éléments montrant l'implication des neutrophiles dans la TV, l'isoforme HNA-3a pourrait favoriser l'adhésion et l'activation du neutrophile à la paroi vasculaire, initiant ainsi le processus de TV. Afin d'expliquer pourquoi l'antigène HNA-3a associé au TRALI est également lié à un risque accru de TV. Nous avons émis plusieurs hypothèses basées 1) sur les propriétés de récepteur de CTL-2 et 2) sur la présence d'auto-anticorps anti-CTL-2 dans la circulation sanguine.

Nous caractériserons l'interaction entre CTL-2 et le facteur de von Willebrand (VWF) et comment le polymorphisme HNA-3a/3b module cette intéraction. Nous définirons le domaine d'interaction entre ces 2 molécules et nous élaborerons des outils permettant le blocage de cette interaction. Pour cela nous utiliserons des cellules HEK-293 transfectées pour surexprimer soit CTL2/HNA-3a soit CTL2/HNA-3b, en conditions statiques ou en chambre de flux.
Le fait que CTL2 soit exprimé dans un étendu large de tissus suggère que CTL-2 pourrait également être la cible d'une maladie auto-immune. Vu que l'auto-immunité est souvent associée à la TV, particulièrement lors du syndrome des anticorps anti-phospholipides, il serait aussi possible que CTL2 puisse être impliqué dans une auto-immunité multi-organes affectant la TV. Bien que différent de la TV, le modèle du TRALI pourrait ainsi montrer la voie dans la compréhension du rôle de SLC44A2 dans la TV, et dans la raison pour laquelle les porteurs de l'isoforme Arg154 ont un risque accru de TV. De plus, des auto-anticorps ciblant CTL2 ont été décrit comme étant associé à des pertes auditives auto-immunes. La recherche d'auto-anticorps anti-CTL-2 sera effectuées sur l'étude cas/témoin EDITH (500 patients en phase aigue de TV). Si l'existence de ces auto-anticorps anti-HNA-3a est confirmée; nous purifierons et caractériserons ces anticorps. Dans un dernier point nous étudierons l'effet du polymorphism HNA-3a/HNA-3b in vivo via notre travail sur des souris SLC44A2 KO et KI. Ces souris seront ensuite soumises au modèle le plus relevant de TV consistant en une ligation partielle de la veine cave inférieure. Nous comparerons le développement du thrombus, la capacité des neutrophiles à adhérer à la paroi vasculaire ainsi que leur capacité d'activation. La capacité des neutrophiles à générer des NETs sera également comparée.