Caractérisation moléculaire et fonctionnelle de vangl2 et de ses partenaires chez le mammifère – vango

Les mutations dans les gènes de la polarité planaires sont liées à des pathologies des organes des sens, du système nerveux central, des tissus contrôlant l'homéostasie, ou encore du tissu cardiaques, pour n'en citer que quelque unes.
Notre projet porte sur l'étude de Van Gogh like 2 (Vangl2) et Scribble 1 (Scrib1), deux molécules fondamentales pour l'établissement de la polarité planaire chez les mammifères.
Nous souhaitons caractériser certains des mécanismes moléculaires et cellulaires activés par le module Vangl2-Scrib1 chez le mammifère. Nous croyons que ces molécules et leurs complexes associés sont essentiels pour le développement normal et la physiologie des organes sensoriels aussi bien que du système nerveux central.
Pour atteindre notre but nous utiliserons une stratégie verticale intégrant :
1. des approches cellulaires et moléculaires (cultures primaires, lignées cellulaires, transfection, siRNA, electroporation etc ...)
2. des approches moléculaires (construction de vecteurs d'expression, mutagénese dirigée, hybridation in situ, etc...)
3. des approches biochimiques (crible double hybride, expression et purification de protéines, spectrométrie de masse, pulldown, co-immunoprecipitation, production d'anticorps et purification, etc...)
4. des techniques de génétique (technique CRE-lox d'excision conditionnelle de gènes)
5. des tecniques d'imagerie (marquage a l'or, microscopie classique, confocal)
6. Approches fonctionnelles (validation de gènes candidat par essai de mobilité, perturbation de l'extension convergente, orientation de touffes ciliaires).
Nous croyons que la collaboration des deux équipes, un spécialiste de l'oreille interne et de la polarité planaire et un spécialiste des cellules épithéliales et des molécules de la polarité mènera à une collaboration forte. Nous exploiterons les connaissances et les expertises des équipes ainsi que tous les outils technologiques et les plateformes mis à notre disposition à l'INSERM U862 NeuroCenter François Magendie et à l'UMR599 INSERM.
Notre projet est basé sur des données préliminaires solides dans chacun des buts que nous nous sommes fixés. Nous sommes confiants en notre capacité de faire les expériences présentées parce que nous avons déjà évalué leur faisabilité dans nos laboratoires. Pour les outils techniques que nous ne maitrisons pas, nous collaborerons avec des équipes qui possèdent l'expertise. Nous nous attendons à trouver :
1. Que Vangl2 pourrait avoir des propriétés adhésives
2. A identifier des mécanismes moléculaires contrôlant les intéractions de Vangl2 avec des partenaires candidats (Scrib1, Fz3, bPIX)
3. La fonction de telles interactions et les cascades moléculaires qu'elles activent (rac1, JNK)
4. L'identification de nouveau partenaires pour Vangl2
5. Développer ou trouver de nouveaux outils pour l'analyse de la polarité planaire (anticorps, inhibiteurs, siRNA, souris transgeniques), ayant un potentiel thérapeutique, ou pouvant servir pour un dépistage prenatal