Syndrome lymphoprolifératif avec autoimmunité et modèles de défauts génétiques de la tolérance au soi. – GENALPD

Le syndrome lymphoprolifératif avec autoimmunité (ALPS) est une pathologie pédiatrique rare, marquée par une lymphoprolifération bénigne et une autoimmunité variable (cytopénies). L'ALPS-I est associé à des mutations dominantes héritées ou acquises du gène codant Fas, un récepteur pro-apoptotique. La pénétrance clinique partielle des mutations de Fas (30% de porteurs sains), suggère l 'existence de gènes modificateurs. Chez des patients ALPS sans anomalie du gène Fas, les lymphocytes sont résistants (ALPS-II) ou sensibles à l'apoptose induite par Fas (ALPS-III) . Nous rechercherons:
1 les facteurs associés au défaut de la voie Fas chez les patients atteints d'ALPS-I
2 Les bases moléculaires de l'ALPS-II (voie de signalisation de Fas)
3 Les bases fonctionnelles et moléculaires de l'ALPS-III et de cytopénies autoimmunes (Evans syndrome)
4 Les bases moléculaires d' un défaut complet d'expression de Fas (ALPS-0).
Notre projet repose sur l'étude d'une cohorte de patients initiée il y a 12 ans. Nous avons obtenu les informations et le matériel cellulaire et génétique de 98 patients avec mutations de Fas (ALPS-I et 0), de 20 patients ALPS-II et de 30 patients ALPS-III. Il s'appuie sur des tests fonctionnels et moléculaires disponibles au laboratoire et sur le développement de nouveaux tests.

1 Afin de déterminer si les gènes modificateurs de l'ALPS-Ia interviennent sur la voie Fas nous effectuerons les tests fonctionnels en parallèle sur les lymphocytes des patients et des porteurs sains (25 familles). En cas de différences significatives nous rechercherons des défauts associés à la voie de signalisation. Dans le cas contraire nous étudierons d'autres voies d'apoptose ainsi que la régulation de la prolifération lymphocytaire (phénotype et fonctions des lymphocytes régulateurs)

2 Sur les lymphocytes T de patients ALPS-II, nous étudierons la voie de signalisation de Fas. Nous étudierons les modifications post-traductionnelles de Fas, essentielles pour l'adressage de Fas dans les radeaux lipidiques et pour une fonction optimale. La faisabilité d'un clonage fonctionnel sera testée afin d'élaborer une nouvelle approche pour étudier l'ALPS-II.

3 Chez les patients ALPS-III et les patients atteints de cytopénies autoimmunes (comme dans le syndrome d'Evans), nous étudierons les voies controlées par Bim (un membre pro-apoptotique de la famille Bcl-2) et par les granzymes qui semblent importantes dans le controle de l'homeostasie lymphocytaire, au moins chez la souris.

4 L'ALPS-0 est un défaut complet d'expression de Fas. Cependant, les mutations associées devraient permettre l'expression d'une protéine tronquée ancrée à la membrane cellulaire. Nous étudierons l'impact de ces mutations sur le trafic de Fas au moyen de molécules chimères (Fas-gfp et Fas-rfp) par microscopie confocale. Le but principal de ce travail est d'identifier les gènes modificateurs impliqués dans l'ALPS-I ainsi que les bases moléculaires et fonctionnelles des autres types d'ALPS (ALPS-II et III) ou de conditions similaires comme les cytopénies autoimmunes (syndrome d'Evans). Nous associerons des approches génétiques et fonctionnelles, et nous étudierons des gènes candidats sur la base de résultats obtenus par les tests fonctionnels. Nous regroupons également le matériel génétique de familles consanguines avec des cytopénies autoimmunes pour développer une étude par cartographie génétique à l'aide de marqueurs polymorphiques (SNPs).
L'identification de nouveau facteurs de susceptibilité aux maladies autoimmunes de l'enfant devrait apporter une meilleure compréhension des mécanismes d'apoptose et de régulation de la prolifération impliqués dans l'homéostasie lymphocytaire et devrait bénéficier aux patients en apportant un meilleur diagnostic et potentiellement une thérapeutique plus adaptée