Rôle des protéines de la recombinaison aux fourches de réplication inactivées – Stabilité ADN

La réplication des chromosomes est susceptible d'être arrêtée par la rencontre d'obstacles ou suite à l'inactivation d'une protéine de réplication. Ces arrêts sont une source d'instabilité chromosomique. Notre travail vise à comprendre les réactions qui se déroulent aux fourches de réplication inactivées chez Escherichia coli. Le présent projet s'articule en trois points. (i) Nous étudierons l'action du complexe RuvAB aux fourches de réplication arrêtées. Ce complexe a été découvert et amplement étudié pour son rôle lors de la résolution des intermédiaires de recombinaison et est très conservé chez les prokaryotes,. Nous avons décrit un nouveau rôle pour ce complexe: RuvAB catalyse la conversion de fourches de réplication en jonction de Holliday, réaction appelée réversion des fourches de réplication. Nous isolerons et analyserons des mutants de dissociation de fonction de ruvA et ruvB, capable de résoudre les jonctions de Holliday mais incapables de catalyser la réversion des fourches de réplication. (ii) Nous avons observé que l'inversion de certaines séquences du chromosome de E. coli rendait l'enzyme RecBC de la recombinaison homologue essentielle pour la viabilité des bactéries. Nous proposons d'identifier les séquences responsables de ce phénotype, de tester s' il résulte d'un problème de progression des fourches de réplication. Si en effet la réplication est arrêtée par certaines séquences lorsque leur orientation sur le chromosome est inversée, nous définirons l'action des protéines de recombinaison à ces arrêts. (iii) Nous étudierons le rôle des hélicases accessoires de la réplication Rep et UvrD. Les mutants de ces gènes sont co-létaux et les raisons de cette co-létalité ne sont que partiellement élucidées. L'isolement de mutations qui suppriment cette co-létalité nous permettra de mieux comprendre le rôle de ces hélicases non-réplicatives aux fourches de réplication.