– DEBCURE

Les patients atteints d'épidermolyse bulleuse dystrophique récessive (EBDR) souffrent dès la naissance de décollements cutanéo-muqueux sévères qui se compliquent fréquemment de fusions des extrémités et d'épitheliomas spinocellulaires agressifs. Les EBDR sont dues à des mutations par perte de fonction du gène codant le collagène VII (COL7A1), constituant principal des fibres d'ancrage, qui sont des structures essentielles pour l'adhésion de l'épiderme au derme. Des variations phénotypiques importantes ont été observées dans des fratries de patients ou entre patients non-apparentés porteurs des mêmes mutations de COL7A1. Sans pouvoir exclure l'intervention de facteurs environnementaux, il est probable que des facteurs génétiques secondaires modifient la sévérité de la maladie. Les différences phénotypiques très significatives, au regard du pronostic fonctionnel et vital, justifient pleinement l'étude de ces facteurs génétiques. Il n'existe actuellement pas de traitement spécifique des EBDR, mais le récent succès de la thérapie génique ex vivo d'une forme jonctionnelle d'épidermolyse bulleuse démontre que le transfert de gène dans les cellules souches épidermiques constitue une approche thérapeutique viable. Dans le développement d'une thérapie génique des EBDR, il est essentiel d'anticiper et de prévenir la survenue d'une réaction immunitaire contre la protéine thérapeutique. Ce projet a pour but d'identifier les gènes modificateurs de la sévérité des EBDR et d'étudier la tolérance immunitaire vis à vis du collagène VII. Il s'appuie d'une part sur l'étude de patients EBDR soigneusement sélectionnés, portant la même mutation mais présentant des différences phénotypiques marquées, et d'autre part sur le développement et l'étude de nouveaux modèles animaux. Nos objectifs sont : Objectif 1 : Identification des gènes modificateurs dans les EBDR. Trois approches complémentaires seront utilisées: 1. Une étude fonctionnelle de gènes candidats dans 3 familles multiplexes EBDR présentant une grande variabilité phénotypique intrafamiliale. Dans un second temps, les gènes candidats dont l'expression varie en fonction de la sévérité seront testés par analyse de liaison dans une grande cohorte de patients présentant des phénotypes de sévérité différente ; 2. Une analyse transcriptomique pan-génomique des cellules des patients EBDR des familles multiplexes ; 3. Le développement et l'étude génétique de nouveaux modèles murins de l'EBDR présentant des sévérités différentes. Cet objectif, en identifiant de nouvelles cibles thérapeutiques, ouvrira la possibilité de traitements pharmacologiques des EBDR. Objectif 2 : Etude de la réponse immunitaire au collagène VII. Nous avons démontré la correction fonctionnelle des EBDR par thérapie génique ex vivo à l'aide de vecteurs rétroviraux. Cependant, le risque d'une réponse immunitaire dirigée contre des épitopes du collagène VII néosynthétisés reste à évaluer. Pour la réponse cellulaire, un test ELISPOT sera développé en utilisant des lymphocytes T et des monocytes isolés du sang périphérique de patient. Une recherche d'anticorps circulants sériques anti-collagène VII sera également effectuée par BIAcore pour tous les patients EBDR. Le génotypage HLA des patients sera effectué, afin de prédire in silico l'interaction des nouveaux épitopes du collagène VII avec les molécules HLA. En permettant d'évaluer et de prévenir la réponse immunitaire ces tests conduiront, d'une part, à sélectionner les meilleurs candidats pour un essai clinique de thérapie génique ex vivo et d'autre part à envisager l'induction d'une tolérance immunitaire ou d'une immunosuppression chez les patients traités. Ils seront également essentiels pour le suivi immunologique des patients dans cet essai clinique. Objectif 3 : Modèle animal de l'EBDR. Une souris invalidée pour le gène du collagène VII a été développée par l'equipe du Prof. J. Uitto, mais la sévérité du phénotype des souriceaux entraîne leur décès dans les deux premières se