– COORDIGENE

L'activation des voies de signalisation contrôlées par le récepteur des estrogènes (ER) et par p53 affecte différents programmes cellulaires en modulant l'expression de nombreux gènes. Dans des cellules de cancer du sein, alors que l'activation de ER par l'estradiol favorise la prolifération cellulaire, l'activation de p53 par un inducteur de stress génotoxique tel que la camptothécine, induit une inhibition de la division cellulaire. L'expression des gènes est un processus comportant plusieurs étapes. L'étape initiale se situe au niveau transcriptionnel et détermine la quantité d'ARN pré-messagers produits. Un second niveau de régulation a lieu lors de l'épissage alternatif et de la polyadenylation qui conduisent fréquemment à la production d'ARNm ayant un contenu en exons différent. Les variants d'épissage produits par un gène codent pour des isoformes protéiques ayant parfois des activités biologiques différentes voire opposées. D'autres niveaux importants de régulation s'exercent lors de l'export des ARNm et de la traduction. - Alors que d'importants efforts ont été faits pour mieux caractériser les effets transcriptionnels de nombreux stimuli, leurs effets au niveau post-transcriptionnel sont peu connus. Cependant, la compréhension des réponses cellulaires à des stimuli transcriptionnels nécessite d'étudier la maturation (épissage, polyadénylation), l'export nucléaire et la traduction des transcrits de leurs gènes cibles. Ces étapes déterminent en effet comment les cellules utilisent les ARNm néo-synthétisés. Dans ce contexte, il est maintenant bien établi que toutes les étapes du processus de l'expression des gènes, de la transcription à la traduction, sont couplées grâce à des facteurs participant à plusieurs étapes. Ce couplage entraîne la possibilité que des stimuli transcriptionnels ont des conséquences sur des évènements post-transcriptionnels. Dans ce contexte, nos travaux et ceux d'autres groupes ont montré que ER module l'épissage alternatif des transcrits de ses gènes cibles et que certains corégulateurs transcriptionnels sont impliqués dans l'épissage. Nous avons également montré un couplage entre l'épissage et la polyadénylation et l'implication de facteurs d'épissage dans la traduction. - Afin de mieux comprendre la régulation de l'expression des gènes, de la transcription à la traduction en réponse à l'activation de ER et de p53, nous avons établi une collaboration entre l'équipe de Didier Auboeuf qui a l'expertise sur le couplage transcription/épissage et l'équipe de Stephan Vagner qui a l'expertise sur le couplage épissage/polyadénylation et traduction. - Dans ce projet, nous analyserons et caractériserons les fonctions dans différentes étapes de l'expression des gènes, de la protéine p68 qui est un corégulateur transcriptionnel de ER et de p53, et qui est aussi une protéine impliquée dans l'épissage. De nouvelles données, en particulier nos données non publiées, suggèrent que p68 est également impliqué dans la polyadénylation, l'export des ARNm et la traduction. Alors que le rôle de p68 a été montré dans la régulation de la transcription en réponse à des stimuli comme l'estradiol ou la camptothécine activant respectivement ER et p53, notre objectif est d'étudier le rôle de p68 dans des régulations post-transcriptionnelles en réponse à ces stimuli. En réalisant ce projet, nous caractériserons : - - le contenu exonique (épissage/polyadénylation) et le devenir (export nucléaire et association avec les polysomes) des ARNm qui sont régulés par l'estradiol et la camptothécine en présence ou en l'absence de p68, en utilisant trois approches complémentaire à grande échelle; - - les fonctions émergentes de p68 dans la polyadénylation, l'export des ARNm et la traduction ; - - et l'impact du recrutement de p68 au niveau de promoteurs sur des évènements post-transcriptionnels. - Cette étude qui se focalisera essentiellement sur p68, mais qui inclura également à certaines étapes d'autres corégulateurs multifon