– ASFGENOMSTAB

Le Rôle des Chaperons d'Histones dans la Stabilité Génomique. Notre équipe s'intéresse aux mécanismes assurant la stabilité génomique chez les eucaryotes au niveau de la chromatine et de la réponse aux stress génotoxiques. Ces mécanismes comprennent l'empaquetage de l'ADN en chromatine qui protège le patrimoine génétique et qui contrôle son accessibilité aux enzymes de transcription, de réplication, de recombinaison, et de réparation de l'ADN. Dernièrement, nous nous sommes focalisés sur le rôle dans la stabilité génomique d'un chaperon d'histones très conservé, Asf1, par une approche transversale alliant la génétique de levure, la biologie cellulaire des cellules de mammifères, et la biologie structurale par RMN. Asf1 est une protéine chaperon d'histone, qui participe à l'assemblage et au désassemblage des histones H3/H4 sur l'ADN. Asf1 n'est pas essentiel pour la viabilité cellulaire chez la levure, mais les voies de surveillance des dommages à l'ADN sont activées de façon constitutive dans des cellules dépourvues d'Asf1, et celles-ci sont hypersensibles à plusieurs types de stress génotoxiques. Asf1 interagit avec plusieurs protéines clés, y compris les histones H3 /H4 et la kinase de checkpoint Rad53. Nous cherchons à définir le rôle de ces interactions dans la stabilité génomique en isolant des mutants « séparation de fonction » qui affectent préférentiellement l'interaction d'Asf1 avec ses partenaires principaux. Nous avons réussi à identifier des mutants qui inhibent l'interaction d'Asf1 avec les histones et nous recherchons actuellement des mutants empêchant l'interaction d'Asf1 avec Rad53. Un deuxième aspect du projet concerne l'identification de nouveaux chaperons des histones H3/H4 chez la levure. De manière surprenante, des cellules S. cerevisiae dépourvues d'Asf1 et de CAF-I sont viables. Nous postulons l'existence d'autres histones chaperons capables de fonctionner (bien que inefficacement) dans l'assemblage de nucléosomes en absence d'Asf1 et CAF-I, et nous proposons des approches expérimentales permettant de les identifier.