ROLE DE L'ITAM INHIBITEUR DANS LA REPONSE IMMUNITAIRE ET DANS LE CHOC SEPTIQUE – INHITAM

RESUME PROJET – Contexte scientifique et objectifs
L'homéostasie du système immunitaire est maintenue par un équilibre strict entre activation et inhibition. Les récepteurs associés aux adaptateurs contenant un motif ITAM (Immunoreceptor Tyrosine-based Activation Motif) peuvent fonctionner, lors d'un engagement faible, comme des inhibiteurs de réponses telles que l'inflammation dépendante des récepteurs aux Fc ou des signaux générés par les pathogènes se fixant aux TLR. Cette inhibition par ITAM, que nous appelons iITAM, ne requiert pas de coagrégation avec les récepteurs activateurs. Notre hypothèse est que la fonction iITAM résulte d'une signalisation intrinsèquement nouvelle permettant un aiguillage d'un état d'activation à un état d'inhibition. Ce mécanisme peut être exploité par certains pathogènes pour envahir l'hôte en mimant un ligand physiologique. Nous étudierons en détail les mécanismes de signalisation en utilisant le récepteur aux IgA (RFcaI) et un récepteur aux IgG (RFcgIII) comme modèles de la fonction iITAM.
RESUME PROJET – Description
Les mécanismes de signalisation conférant la fonction inhibitrice iITAM à la chaîne FcRg associée au RFcaI et associée au RFcgIII dans le sepsis seront étudiés.
Dynamique des effecteurs: La dynamique de la voie inhibitrice du RFcaI sera étudiée avec haute résolution cinétique par vidéo-imaging et microscopie confocale. Nos observations montrent un rôle du cytosquelette qui sera analysé en étudiant la dynamique de la voie inhibitrice en présence d'agents altérant la polymérisation de l'actine. La capacité du RFcaI à inhiber d'autres voies d'activation que celles impliquant le motif ITAM (récepteurs tyrosine kinases, ou couplés à des kinases ou à des protéines G) sera examinée.
Identification des effecteurs moléculaires: Les effecteurs proximaux du iITAM seront identifiés par co-immunoprécipitation avec le RFcaI et analyse protéomique. De plus, des anticorps seront produits contre ces effecteurs pour cribler une banque d'expression d'ADNc. Les effecteurs distaux seront identifiés par analyse protéomique des espèces moléculaires dont la phosphorylation démontre des changements quantitatifs en condition inhibitrice. Des siRNA spécifiques serviront à confirmer leur implication.
Analyse de la fonction inhibitrice du RFcgIII: Les souris déficientes en RFcgIII démontrent une résistance au sepsis expérimental et une phagocytose accrue d'E.coli révélant une fonction inhibitrice détrimentale du RFcgIII. L'interaction du RFcgIII avec les E.coli non opsonisées sera analysée en bloquant cette interaction avec le RFcgIII soluble. Des souris déficientes pour d'autres RFcg seront examinées dans le sepsis expérimental. Les effecteurs proximaux de l'inhibition de la phagocytose par iITAM seront identifiés. Les tyrosines du iITAM impliquées seront identifiées avec des transfectants exprimant des iITAM sauvages ou mutés. Des transfectants seront utilisés pour cribler des composés interférant avec la voie de signalisation inhibitrice en vue de nouvelles thérapies contre le sepsis.
RESUME PROJET – Resultats attendus
Seuls les récepteurs à ITIM ont été étudiés comme inhibiteurs du système immunitaire. Notre étude récente démontrant une fonction inhibitrice pour le motif ITAM a dévoilé un autre mécanisme important pour l'homéostasie de ce système souligné par nos observations non publiées dans le sepsis expérimental. La possibilité de moduler cette fonction à fins thérapeutiques est démontrée par nos données publiées dans l'asthme. Les mécanismes impliqués sont pourtant mal compris. L'analyse de la dynamique des effecteurs et du cytosquelette dans cette fonction inhibitrice permettra de discriminer les mécanismes impliqués dans l'inhibition par iITAM de ceux impliquant ITIM. L'étude de la fonction iITAM dans le contexte de différents récepteurs permettra de définir le spectre de l'implication physiologique du iITAM. La recherche d'effecteurs spécifiques de iITAM permettra d'identifier des cibles pour