Etude structurale in situ de protéines membranaires par RMN à l'état solide – MPs & ssNMR

Le but de ce projet est la détermination structurale de protéines membranaires au sein de leur environnement natif, la membrane lipidique. Avec l'avènement de la protéomique et le séquençage du génome humain, la biologie structurale est un domaine en plein essor où la cristallographie aux rayons-X est, pour le moment, la technique la plus efficace. La RMN est une technique préférable dans certains cas. L'un de ces cas est l'étude de protéines membranaires au sein d'une membrane, pour laquelle la RMN à l'état solide est une méthode de choix. Bien que les développements dans ce domaine soient de très haute technicité, la possibilité d'obtenir des informations in situ justifie l'effort fourni. En particulier, les informations structurales obtenues jusqu'à présent sur des canaux ioniques concernent surtout des formes fermées, car l'ouverture de ces canaux dépend généralement de processus transmembranaires. Ce projet bénéficie de deux progrès récents majeurs: d'abord dans le domaine de la technologie des spectromètres RMN à l'état solide et ensuite dans l'extension aux protéines membranaires de la technique de synthèse in vitro. Nous sommes un groupe de jeunes chercheurs expérimentés, nous avons déjà entamé le projet décrit ici et nous disposons de la plupart de l'équipement nécessaire. Néanmoins, ce projet est un projet à long terme qui nécessite une grande quantité de produits coûteux (principalement des acides aminés isotopiquement marqués). Dans un premier temps, nous appliquerons cette approche au canal ionique mécano-sensible bactérien MscL dans sa forme fermée et, dans un deuxième temps, dans sa forme ouverte. Ce protocole et cette collaboration serviront ensuite de modèle pour d'autres études structurales, pour d'autres canaux ioniques ou pour d'autres protéines membranaires.