– IMPP

Les protéines membranaires (PM) représentent environ un quart des protéines totales. Leurs rôles dans les mécanismes de transport et de signalisation en font des cibles évidentes pour des molécules thérapeutiques. Jusqu'à présent, la plupart des PM a été étudiée dans leur contexte cellulaire. L'expression hétérologue de ces protéines constitue un goulet d'entranglement rendant diffcicile l'étude structurale et fonctionnelle des PM purifiées. Ce projet vise à développer de nouvelles méthodes pour la production des PM. L'expression hétérologue des PM échoue souvent car ces protéines, au cours de leur synthèse, doivent être insérées dans la membrane de l'hôte: une saturation des sites d'insertion est probablement à l'origine de mauvais repliements et/ou de la protéolyse des protéines. Afin de contourner ce problème, les participants 1 et 4 ont récemment produit un canal mécanosensible MscL fonctionnel dans un système acellulaire, en absence de membrane et en présence de détergent. Un des objectifs de ce programme est l'application de la synthèse in vitro à toute une série de PM eucaryotes et procaryotes. Les partenaires 1, 2 et 4 tenteront la synthèse acellulaire de canaux eucaryotiques et des recepteurs couplés aux proteines G (GPCR) dont la fonction sera vérifiée respectivement par des méthodes électrophysiologiques et des tests de liaison. De plus, le participant 3 vient d'obtenir la première structure à résolution atomique d'une protéine membranaire recombinante eucaryote: la structure de SERCA 1 produite dans la levure est similaire à celle de la protéine native. Une protéine de fusion avec un site de fixation pour la biotine a été conçue afin de permettre, après biotinylation in vivo dans la levure, une purification sur colonne d'avidine. Puisque seules les protéines correctement repliées sont biotinylées, la procédure élimine les formes protéiques dénaturées. Nous envisageons en collaboration d'étendre cette approche à la synthèse d'autres PM eucaryotes -