Evaluation hors confinement de porte-greffes de vigne transgéniques développés pour induire une résistance au Grapevine fanleaf virus, agent principal de la maladie du court-noué. Analyse du mécanisme mis en jeu et impact sur les populations virales et le – FonvirusGRAPEVINE

Le court-noué est la maladie virale la plus dommageable pour la vigne, dont l'agent responsable principal est le Grapevine fanleaf virus (GFLV). Le vecteur naturel de ce népovirus est le nématode Xiphinema index. Il n'existe à l'heure actuelle aucune résistance naturelle connue à ce virus. La lutte au vignoble est basée principalement sur l'utilisation de nématicides qui visent à réduire les populations de nématodes vecteurs. Cependant cette approche est d'efficacité limitée et dangereuse pour l'environnement. En plus l'utilisation de ces nématicides sera prochainement interdite (2007). La résistance dérivée du pathogène est une stratégie prometteuse pour protéger la vigne contre la maladie du court-noué. Une expérimentation menée au champ de 1996 à 1999 avec un nombre restreint d'événements de transformation a montré que 3 lignées transgéniques sont résistantes au GFLV. Cependant ces essais ont été interrompus en 1999 après le retrait du partenaire industriel. A la demande de la Direction Générale de l'INRA, une expérience pilote sur les vignes transgéniques a été mise en place. Ainsi, un groupe de réflexion composé de scientifiques, de représentants de la filière viti-vinicole et de la société civile se sont interrogés sur la reprise d'un essai en plein champ de porte-greffe transgéniques résistant au GFLV. L'évaluation de ce groupe de travail (http://www.inra.fr/internet/Directions/SED/science-gouvernance/ITA-Vignes/index.html) a permis d'analyser l'intérêt de cette recherche et son acceptabilité, moyennant un certain nombre de recommandations. Ainsi la méthodologie d'expérimentation a été définie en coordination avec un comité local de suivi, aboutissant à la soumission de la demande d'autorisation auprès de la commission de génie biomoléculaire (CGB). La décision ministérielle d'autorisation (5 juillet 2005) de plantation est à présent acquise, suite à l'avis favorable de la CGB. L'essai prévu en milieu non confiné fait appel à 70 plants de vigne constitués d'un porte-greffe transgénique exprimant le gène CP et d'un greffon non-transgénique, plantés dans un sol hébergeant des X. index virulifères. Cinq évènements de transformation indépendants seront installés sur un site expérimental, hors vignoble AOC, ainsi que des plants non-transgéniques témoins. Le but de l'expérimentation est de vérifier les résultats préliminaires de protection et d'analyser les risques potentiels pour l'environnement. Des données de biosécurité sont déjà connues concernant la probabilité d'apparition de GFLV recombinants.
Cette expérimentation hors confinement visera les objectifs scientifiques suivants :
? Confirmer nos données préliminaires sur le niveau de protection des porte-greffes transgéniques vis-à-vis de l'infection naturelle du GFLV via les nématodes vecteurs avec un inoculum différents de la précédente expérimentation. Seul un essai en plein champ permettra d'apporter des réponses claires sur l'efficacité et la durabilité de la résistance. Les conditions de plein champ (physiologie de la plante, stress biotiques et abiotiques, température, hygrométrie, etc…) sont différentes de celles d'un milieu confiné. Ces différences peuvent influencer l'expression des gènes et donc les mécanismes de « gene silencing » mis en place par les plantes exprimant une résistance dérivée du pathogène.
*Evaluer l'effet des porte-greffes transgéniques sur la dynamique et la variabilité génétique des populations de GFLV transmises par les nématodes virulifères (possibilité d'émergence de nouveaux variants viraux par recombinaison, dynamique des populations de nématodes virulifères…)
*Suivre la mobilité des nématodes vecteurs du GFLV
*Analyser le transfert éventuel des produits du transgène (protéines, mRNAs, siRNAs) du porte-greffe transgénique vers le greffon non-transgénique
*Enfin la recherche de suppresseur viral chez le GFLV permettra de mieux apprécier la durabilité d'une résistance chez une vigne constituée d'un porte-greffe transgénique et d'un g