– MutS nanobio

Ce projet porte sur l'étude à l'échelle de la molécule unique , du système bactérien de protéines MutS, MutL et MutH, qui ont pour fonction l'initiation de la réparation des erreurs de réplication de l'ADN, ou encore pour MutS/L, la prévention de la recombinaison entre ADN trop divergents en séquence. Le contexte: Ces protéines sont des agents très importants de la stabilité des génomes, et on retrouve des homologues de MutS et MutL chez tous les êtres vivants, de la bactérie à l'homme. Le fonctionnement détaillé de ces protéines est cependant mal connu et fait l'objet de débats intenses. Ce système présente les singularités (i) de pouvoir agir à distance entre site de fixation sur mésappariement, et déterminant de brin à réparer, et (ii) d'avoir au final une très grande sélectivité globale, alors que la sélectivité de fixation in-vitro de MutS sur un mésappariement est très médiocre. Objectif et moyen d'étude: L'objectif du projet est de comprendre le/les mécanismes de fonctionnement de ce système, en se basant de façon centrale sur des techniques de micromanipulation de molécule unique: Il est attendu en effet que la/les fixations de MutS et MutL modifie la conformation de l'ADN, ce qui permettra de suivre en temps réel les étapes d'initiation de la réparation, donnant dès lors une méthode puissante d'investigation du mode de fonctionnement de ces enzymes. Ces mesures seront complétées en parallèle par des observations en microscopie électronique, pour aider à déterminer les modes éventuellement collectifs de fixation des protéines sur l'ADN. Enfin, ces observations seront accompagnées d'une étude restreinte in-vivo, pour chercher à déterminer l'influence de la stochiométrie de MutS et MutL sur la réparation et l'antirecombinaison.