Analyse en molécule unique des évènements de recombinaison homologue – SMART

Les cassures double brin (CDBs) de l’ADN peuvent être accidentelles ou programmées, comme lors de la méiose pour la production des crossingover et la ségrégation égale des chromosomes homologues. Les CDBs sont une menace pour l’intégrité du génome et doivent donc être fidèlement réparées, pour éviter les aneuploïdies, maladies génétiques ou l’apparition de cancers. Notre projet mettra en lumière les mécanismes fins d’un type de réparation des CDBs, la recombinaison homologue, grâce à l’utilisation d’approches innovantes combinant des approches expérimentales et computationnelles.
De nombreux aspects de la réparation des CDBs par recombinaison sont peu compris, car les études sur de larges populations cellulaires ne permettent pas d’élucider certains aspects de leur régulation fine. Cependant, il est essentiel d’améliorer notre compréhension des mécanismes de recombinaison, particulièrement la synthèse d’ADN qui lui est associée, car celle-ci peut être source de mutations délétères. Nous proposons d’utiliser une approche de séquençage en longues molécules uniques des évènements de synthèse d’ADN associés à la réparation des CDBs, dans deux systèmes expérimentaux (chez la levure et les cellules humaines) où des CDBs sont produites à des séquences connues le long du génome.
Ceci nous donnera accès à la distribution des CDBs dans les cellules uniques, le choix de la matrice utilisée pour la réparation, ainsi que les déterminants en cis ou en trans de la longueur des évènements de synthèse, dans les cellules méiotiques, somatiques et à différentes étapes du cycle cellulaire. Enfin, nous déterminerons à quel point ces évènements de synthèse sont mutagènes.
L’originalité et la force de notre projet résident dans la combinaison de deux systèmes expérimentaux complémentaires avec des approches de pointe de séquençage à haut débit et la collaboration étroite entre deux laboratoires expérimentaux et un laboratoire de bioinformatique, chacun reconnu dans leur domaine respectif.