Adressage sub-cellulaire de sondes nanoFRET pour l’imagerie de nanodomaines ioniques dans des cellules vivantes – nanoFRET²

Mesure de la concentration en Ca2+ près d'une molécule cible intracellulaire.
Le Ca2+ est un messager secondaire pour de nombreuses réactions cellulaires (métabolisme, expression
des gènes, trafic vésiculaire…). La spécificité de cette signalisation est accentuée par l'existence de
Référence du formulaire : ANR-FORM-090601-01-01 2/11
gradients Ca2+ très localisés dont la durée de vie peut être très brève (ms). Le développement de
sondes calciques a permis de révéler l'existence de transitoires calciques, mais non leur amplitude
exacte ni leur localisation précise, et ceci pour deux raisons. D'une part , le nombre de molécules
sensibles au Ca2+ au voisinage des molécules biologiques d'intérêt peut être faible au regard du
nombre d'ions divalents accumulés par exemple au voisinage d'un récepteur canal comme le récepteur
NMDA. Par ailleurs, la diffusion des ions Ca2+ et des sondes conduit à l'effondrement rapide de ces
gradients. Notre but a donc été de concentrer des molécules sensibles à Ca2+ sur une particule à
diffusion lente avec l'idée de l'immobiliser ultimement sur un épitope antigénique de la molécule
d'intérêt. L'utilisation de QDots comme molécule cargo permettait d'envisager la localisation du
nanobiosenseur dans le vert avec simultanément excitation par FRET de la sonde émettant dans le
rouge en présence de Ca2+.