Suivi par RMN de l'engagement de médicaments sur leur cible en cellule et en organoïdes – LiveDrugsNMR

Nous voulons établir des protocoles pour la détection par RMN de l'interaction de médicaments à leurs cibles enzymatiques dans des cellules vivantes et des sphéroïdes, et illustrer les premières applications de ces protocoles.
Les membres de l'équipe, experts en biologie structurale assistée par RMN, en biochimie et en biologie cellulaire, devront :
i) produire des lignées cellulaires et des sphéroïdes biologiquement pertinents avec une expression inductible d'un ensemble de cibles médicamenteuses >30 kDa (CA-II, les kinases Abl et Erk2, l'ubiquitine-ligase Mdm2),
ii) marquer ces enzymes à l'isotope 13C lors de l'induction de leur production, ce qui permettra l'observation sélective des enzymes étudiées à l'aide d'un filtre RMN 13C dans des cellules 12C,
iii) suivre les pics RMN de l'enzyme marquée 13C dans des cellules et des sphéroïdes de foie/poumon lors de l'exposition à des inhibiteurs, ce qui permettra un suivi longitudinal sur plusieurs jours.
Le coordinateur du projet, FXT, a déjà établi et exploite actuellement ce schéma expérimental sur des cellules inductibles transfectées de manière stable. Ce projet vise à étendre le principe de la « RMN in-cell » pour obtenir des informations à l'échelle atomique sur des cibles de médicaments comme les kinases ou les protéases virales dans des assemblages cellulaires en 3D. La méthode est non destructive et complémentaire de la microscopie ou de la spectrométrie de masse. La « RMN in-cell » décrite sur les spheroïdes constituera une source d'informations attrayante, évitant les sacrifices d'animaux, pour combler le « fossé translationnel » qui voit la plupart des candidats médicaments échouer en clinique.