Interactome de KIF2C à la jonction entre microtubule et kinétochore en mitose – KIFMITO

Au cours de la division cellulaire, le fuseau mitotique contrôle la répartition des chromosomes dans les cellules filles. La dépolymérase des microtubules KIF2C/MCAK facilite la correction des erreurs d'attachement des microtubules au kinétochore (MT-k). L’absence de KIF2C provoque des défauts de ségrégation des chromosomes comparables à ceux de cellules cancéreuses présentant une instabilité chromosomique. Les partenaires 1 et 2 ont récemment observé que KIF2C forme des organites sans membrane de manière phospho-dépendante à la jonction MT-k en prométaphase. Ils ont découvert que la région N-terminale de KIF2C contient un domaine de liaison à des phospho-peptides essentiel à la condensation de KIF2C. Dans ce projet, nous allons explorer l'interactome de KIF2C en mitose, afin de déchiffrer les mécanismes de condensation de KIF2C, identifier les partenaires de KIF2C au sein de ces condensats, et révéler quel role jouent ces condensats dans l'organisation du fuseau, l'attachement MT-k et le contrôle de l'assemblage du fuseau. Pour cela, le partenaire 1 identifiera in vitro les mécanismes d'oligomérisation de KIF2C. Le partenaire 2 utilisera sa plateforme optogénétique pour tester l'effet de mutations perturbant l’oligomérisation sur la condensation de KIF2C dans les cellules, et recherchera les partenaires de KIF2C dans les condensats, soit en utilisant un marquage par la TurboID fusionnée à KIF2C, soit en précipitant les complexes avec l’étiquette Halo fusionnée à KIF2C exprimée de façon endogène. Le partenaire 1 caractérisera structuralement les complexes identifiés et concevra des mutations aux interfaces qui seront testées par le partenaire 2. Le partenaire 3 utilisera les cellules exprimant Halo-KIF2C de façon endogène pour caractériser la fonction des condensats de KIF2C lors de la mitose. Enfin, le partenaire 4 explorera, par imagerie à haute résolution spatiale ou temporelle, comment les condensats de KIF2C régulent son activité dépolymérase au kinétochore.