Stratégies basées sur la spectrométrie de masse pour ajouter une dimension structurale à la détection précode de souches pathogène d'a-Synucléine par agrégation induite par conversion – MS-QuIC

Les synucléinopathies se caractérisent par l’accumulation de fibrilles d’a-Synucléine dans les tissus. La croissance de ces fibrilles peut être initiée à partir de protéines mal repliées, celles-ci pouvant exister sous différentes formes structurales ou souches. La présence de ces précurseurs peut être détectée avant l’apparition de fibres par des méthodes comme la RT-QuIC qui tire profit de la capacité d’une protéine pathologique à induire un mauvais repliement chez d’autres protéines. Le principe de la RT-QuIC est d’ensemencer un milieu riche en protéines normales avec une faible quantité de protéine potentiellement pathologique. En cas de positivité, l’apparition de fibres est suivie en temps réel en mesurant la fluorescence de sondes spécifiques comme la thioflavine T (ThT). Cette méthode ne donne cependant aucune information structurale et c’est le but du projet MS-QuIC que d’ajouter une dimension structurale à l’analyse RT-QuIC afin de mieux en exploiter les résultats. Nous proposons pour cela une combinaison originale de techniques de spectrométrie de masse qui permettra de caractériser les produits d’agrégation depuis les petits oligomères jusqu’aux fibrilles. Pour les oligomères, la spectrométrie de mobilité ionique (IMSMS) permettra une analyse en taille et en morphologie et la spectrométrie par détection de charge (CDMS) sera utilisée pour les protobibrilles et les fibrilles, complémentée par la microscopie électronique. Ces expériences seront menées sur des échantillons prélevés à différentes étapes de mesures RT-QuIC initiées à partir de produits d’amplifications obtenus à partir de différentes souches structurales. La corrélation entre les différentes méthodes se fera par des mesures de fluorescence en source au cours des mesures d’IMSMS et de CDMS. Au-delà de la RT-QuIC, les méthodes développées ont vocation à s’appliquer à l’étude d’autres processus d’agrégation.