Nouveaux revêtements ioniques mutlicouches pour les séparations ultra-efficaces, limitées par la diffusion, de protéines intactes par électrophorèse capillaire et son couplage à la spectrométrie de masse – SMIL E

L'électrophorèse capillaire (EC) devient de plus en plus importante pour l'analyse des protéines (intactes) en raison de sa sélectivité et de son efficacité élevée. C'est particulièrement le cas lorsque cette technique est couplée à la spectrométrie de masse (MS), puisque des interfaces plus sensibles pour le couplage CE-MS deviennent disponibles, tout comme les capacités de la MS pour la caractérisation des protéines qui ont été considérablement améliorées, telles que la fragmentation top-down MS / MS. Néanmoins, l 'efficacité de séparation de la CE n'atteint souvent pas du tout les valeurs théoriques attendues en raison d'interactions protéines - capillaires indésirables. Pour éviter ces phénomènes d'adsorption, des revêtements ont été développés. Jusqu'à présent, les revêtements appelés multicouches de polyélectrolytes (SMIL) sont parmi les meilleurs, tels que récemment développés dans nos laboratoires. Cependant, même de très faibles adsorptions de protéines résiduelles limitent fortement l'efficacité de séparation CE pour l'analyse des protéines. Dans ce projet, nous proposons la synthèse de nouveaux polycations (la couche la plus externe du revêtement, qui interagira avec la protéine) avec des performances optimales en ce qui concerne (i) la stabilité du revêtement, (ii) l'absence d'adsorption des protéines et (iii) l'adaptabilité du flux électro-osmotique. La stratégie proposée comprend non seulement de nouveaux polycations avec des groupes zwitterioniques supplémentaires pour les propriétés anti-adhésives, mais aussi pour la première fois des homopolymères basés sur des groupes fonctionnels peptidiques. Ces nouveaux polyélectrolytes synthétisés seront évalués par séparation CE d'un ensemble de protéines modèles à l'aide de revêtements SMIL à 5 couches en combinaison avec le poly (L-lysine citramide) (PLCA) et le poly (acide méthacrylique) (PMA). Les nouveaux revêtements seront classés en fonction de l'adsorption résiduelle, de l'efficacité de séparation et de la mobilité électroosmotique. Les meilleurs revêtements seront utilisés pour diverses applications d'analyse des protéines intactes par CE-MS dans les domaines pharmaceutique et biologique. Cela comprendra la caractérisation de l'hétérogénéité des variants de charges d'anticorps biopharmaceutiques ainsi que l'analyse de mélanges de protéines complexes provenant de cultures cellulaires et de fluides biologiques. Afin d'obtenir une grande robustesse et une meilleure sensibilité, une interface nanosheath liquide CE-MS sera modifiée pour les conditions de mobilité électroosmotique élevée de ces revêtements polycationiques. Dans l'ensemble, nous prévoyons de développer de nouveaux revêtements pour des surfaces en silice empêchant l'adsorption de protéines conduisant à des performances optimales en CE et CE-MS ainsi que de nombreuses autres applications potentielles.