Nouvelles sondes pour la détection de Métallo protéases par spectrométrie de masse – ProMaP

Le but de ce projet est de développer une nouvelle génération de sondes chimiques permettant la détection sensible des formes actives de métallo protéinases présentes en très faible abondance en milieux complexes et in vivo. Ces nouvelles sondes incorporeront dans leur structure un motif de reconnaissance, un lien réactif et une étiquette pour une analyse ciblée en spectrométrie de masse. Cette étiquette sera introduite de façon sélective au sein du site actif des métallo protéinases et sera compatible avec une analyse directe des fluides biologiques ainsi qu’une analyse sur coupes de tissu. Les métallo protéinases modifiées de façon covalente seront ensuite digérées et le mélange de fragments peptidiques résultant sera analysé en conditions discriminantes d’ionisation et de désorptions assistées par laser. Dans ces conditions, les fragments modifiés par l’étiquette seront distingués préférentiellement des fragments non modifiés. Cette approche devrait ainsi nous permettre d’une part de distinguer les formes actives de métallo protéinases des autres formes inactive ou inactivées et d’autre part de les quantifier. Cette stratégie de protéomique  guidée sera évaluée in vitro mais également in vivo à travers l’encapsulation des sondes chimiques dans des nanoparticules. Ceci devrait nous permettre pour la première fois d’étudier les métallo protéinases dans leur environnement natif et donc de mieux appréhender leur rôle en conditions physiologiques et pathologiques.