Production de protéines membranaires recombinantes insérées dans les membranes de cavéoles hétérologues – CAVEOTANK

Les protéines membranaires (PMs) jouent un rôle crucial dans une grande variété de processus cellulaires; elles sont impliquées dans de nombreuses pathologies et constituent des cibles pharmacologiques majeures. Leur surproduction dans des systèmes hétérologues est indispensable pour une analyse structure/fonction plus détaillée de ces protéines. Cette stratégie implique la résolution de nombreux problèmes tels que la toxicité des protéines surexprimées pour leurs hôtes et la qualité des protéines membranaires produites dans ces systèmes, en particulier pour des études structurales. Nous proposons une approche originale pour produire des vésicules enrichies en PMs en utilisant la capacité d’une petite protéine membranaire à générer des vésicules membranaires dans le cytoplasme de différents hôtes. En effet, la surexpression de la Cavéoline 1ß peut produire des vésicules appelées cavéoles hétérologues dans les organismes hôtes. Cette production, observée dans la bactérie Escherichia coli et dans les cellules d’insectes Sf21, sera testée dans deux autres organismes utilisés également pour l’expression de protéines membranaires : la bactérie Lactococcus lactis et le parasite Leishmania tarentolae. Trois PMs humaines d’intérêt pharmacologique majeur et de structure et fonction différentes ont été choisies pour évaluer cette approche: la glutathione S-transférase microsomale (hMGST1) humaine, le transporteur humain ABCG2 et le récepteur BLT2 couplé aux protéines G. Ce projet est basé sur une collaboration étroite entre trois laboratoires qui possèdent des connaissances et des savoir-faire complémentaires notamment pour l’utilisation de différents organismes hôtes dans le but de produire des PMs ainsi que les analyses fonctionnelles et structurales de ces protéines.