Caracteristion moléculaire et control thérapeutque de la stabilisation pathologique de la C3 convertase du compément – COMPC3

Le Complément est un membre de l’immunité innée entrainant une inflammation, la destruction des pathogènes mais aussi des lésions tissulaires s’il est activé de façon excessive. Le complexe enzymatique le plus important est la C3 convertase alterne, C3bBb, responsable du clivage de C3 en son fragment bioactif le C3b. Le complément est un système peu spécifique qui requière une régulation fine pour éviter une activation inappropriée entrainant une agression des cellules hôtes, une inflammation, des thromboses qui ont principalement comme cibles les cellules rénales. Plusieurs protéines ont la capacité de réguler négativement cette voie d’activation mais il n’existe qu’une seule protéine, la Properdine, capable de stabiliser le complexe C3bBb. La properdine lie la C3 convertase et le C3b liés de manière covalente au tissu et pourrait jouer un rôle majeur dans la conversion d’une C3 en une C5 convertase. Le site de fixation de la Properdine sur C3b et sur la C3bBb n’est pas connu ainsi que son mode d’action au niveau des tissus. Dans les pathologies la C3 convertase est stabilisée par un auto anticorps, le C3 NeF, qui reconnait un néo-épitope présent à la surface de la convertase après sa formation. Le site de fixation n’est pas connu et il n’existe aucune donnée sur les épitopes potentiels et les interactions avec les autres régulateurs de la convertase comme le Facteur H. La présence de C3 NeF est constatée au cours des glomérulopaties à dépots de C3, qui regroupent des pathologies glomérulaires liées à une hyperactivation non contrôlée de la C3 convertase alterne, dans la phase fluide ou tissulaire qui entraine le dépot de produits de dégradations du C3 (iC3b, C3dg, C3d) dans le mésangium et la paroi des capillaires glomérulaires. Nous avons étudié et publié la plus grande série de patients porteurs d’une glomérulopathie à dépôts de C3, pour lesquels un C3 NeF a été mis en évidence dans 60% des cas. La caractérisation des épitopes du C3 NeF est reconnue difficile par la structure labile de cet enzyme. L’objectif de ce projet est de caractériser la région de la C3 convertase importante pour sa fonction. Ce projet à l’ambition de caractériser les sites de fixation des molécules de Properdine et de C3 NeF, ce qui n’a pas été possible par les techniques biochimiques classiquement utilisées compte tenu de la nature complexe de cet enzyme. Nous proposons une approche expérimentale innovante utilisant un test fonctionnel qui a déjà permis de caractériser trois types différents de NeF par leur capacité d’interaction avec la C3 convertase liée ou pas avec la Properdine. Nous avons démontré que la capacité du C3 NeF d’amplifier le clivage de C3 peut être augmentée en présence de Properdine ce qui suggère des sites de fixation différents. Caractériser le site de fixation est une étape indispensable pour identifier de nouvelles molécules avec un potentiel thérapeutique. Un second objectif de ce projet est d’identifier de nouveaux biomarqueurs qui permettront d’évaluer l’activation de la C3 et de la C5 convertase mais aussi de développer une nouvelle technique pour le diagnostic. Nous souhaitons utiliser les peptides générés par ce projet pour mettre en évidence directement cet auto-anticorps par des techniques immunochimiques. Nous avons pour objectif d’identifier des peptides potentiellement thérapeutiques, d’en optimiser certains, de proposer des petites molécules chimiques candidates à partir des meilleurs peptides et de développer des technologies innovantes pour la thérapeutique de cette maladie actuellement orpheline de traitement. Ces peptides optimisés et les petites molécules chimiques non-peptidiques permettront d’ouvrir la voie vers la recherche de nouvelles molécules thérapeutiques pour toutes les pathologies complément –dépendantes.