Identification des cofacteurs cellulaires du facteur de restriction virale BST2/Tetherin: Rôle physiologique dans la fonction de BST2 et sa modulation par les protéines virales Vpu et Nef. – BST-2-Ints

Afin d’évaluer et valider le rôle fonctionnel des cofacteurs identifiés de BST2 dans (i) la régulation des ses fonctions et son antagonisme par les protéines virales Vpu et Nef, nous avons choisi la technique d’ARN interférents afin d’éteindre spécifiquement l’expression de chacun de ces cofacteurs dans les cellules. Nous avons ensuite analysé, au cours de ces 6 derniers mois, les conséquences de ces déplétions sur les niveaux d’expression et la localisation de BST2 dans les cellules par le biais de techniques adaptés

Nous avons développé des outils efficaces afin d'éteindre spécifiquement l'expression de 6 co-facteurs de BST2, et mis au point les techniques permettant d'analyser les niveaux d'expression et localisation de nos protéines dans les cellules.
L’ensemble des résultats obtenus jusqu’ici suggère un rôle fonctionnel de la plupart de nos protéines candidates dans la régulation de l’expression et/ou du trafic intracellulaire de BST2. En effet la déplétion de l'expression de 5 de nos protéines individuellement, modifie de façon drastique la quantité de BST2 dans les cellules, de même que sa localisation au sein des cellules.

Les futurs travaux consisteront à caractériser de façon précise les mécanismes par lesquels nos protéines candidates contribuent à la régulation de l’expression et/ou du trafic intracellulaire de BST2 dans un contexte non-infectieux. Nous évaluerons ensuite l’importance de ces co-facteurs de BST2 dans (1) son activité anti-virale et (2) les processus mis en œuvre par Vpu du VIH-1 et Nef du SIV pour contrecarrer son activité.

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La propagation des virus de l’immunodéficience humaine (VIH–1 et VIH–2) et simienne (VIS) dans ses cellules cibles met en jeu des événements moléculaires et cellulaires impliquant des interactions entre les composants viraux et les protéines cellulaires. Le virus doit notamment échapper aux mécanismes de défense de l’hôte afin de disséminer dans l’organisme. Récemment la protéine cellulaire BST2 (également appelé Tetherin) a été identifiée comme un facteur de restriction virale qui bloque la libération des particules virales en les retenant physiquement à la surface des cellules infectées. Il a été montré que la protéine Vpu du VIH–1 contrecarre cette restriction en diminuant le niveau d’expression de BST2 à la surface des cellules, rétablissant alors une libération efficace des particules virales. Seuls les génomes du VIH–1 et de certains isolats du VIS possèdent le gène d’expression de Vpu. Dans le cas du VIH–2 et des VIS n’exprimant pas Vpu, la restriction imposée par BST2 est levée par respectivement, par les glycoprotéines d’enveloppe (Env) et la protéine auxiliaire Nef.
A ce jour, le mécanisme exact responsable de l’activité anti-virale de BST2, de même que les mécanismes impliqués dans la modulation de son expression par les protéines virales sont pas clairement élucidés. Afin de mieux caractériser ces processus nous avons donc émis l’hypothèse qu’une meilleure connaissance des mécanismes moléculaires et cellulaires régulant la fonction de BST2 permettrait de mieux appréhender son rôle au cours de la production virale. Nous avons donc entrepris un criblage protéomique afin d’identifier des cofacteurs cellulaires de BST2 potentiellement requis pour ces fonctions cellulaires. Nous proposons dans un premier temps d’analyser et de valider le rôle de ces cofacteurs dans la fonction et la régulation de BST2 dans un contexte non–infectieux. Nous analyserons dans un second temps le rôle de ces cofacteurs dans l’activité anti-virale de BST2 et sa modulation par les protéines virales Vpu du VIH–1 et Nef du VIS. Enfin nous évaluerons le rôle de ces cofacteurs dans la transmission du VIH–1 par le biais des synapses virologiques.