Trafic vésiculaire et effecteurs de signalisation contrôlant la sécrétion de médiateurs inflammatoires par les mastocytes. – InflaMedTraff

De nombreuses maladies chroniques, comme les allergies, l'arthrite, le diabète, des néphropathies, les maladies infectieuses et les cancers ont à la base une fonction altérée de la réponse inflammatoire qui peut ainsi se transformer en « tueur secret ». Une étape clé du processus inflammatoire est la sécrétion de médiateurs inflammatoires à partir de sources préformées ou nouvellement synthétisées. Dans un site inflammatoire, une cellule doit intégrer de nombreux signaux d’activation distincts pour produire ces médiateurs. Cibler ces signaux individuellement ne représente donc pas la stratégie thérapeutique la plus prometteuse. Au contraire, la prévention de la sécrétion par un blocage complet de cette réponse en ciblant les étapes tardives de signalisation convergeant de stimulations multiples représente une stratégie thérapeutique attractive. Dans ce projet, nous combinons l’expertise d'une équipe française et de deux équipes mexicaines spécialisées dans l’étude des étapes tardives de signalisation et du trafic vésiculaire. Nous cherchons à identifier des protéines cibles et les mécanismes de signalisation impliqués dans le trafic vésiculaire au cours de la sécrétion des médiateurs. Nous utiliserons comme modèle le mastocyte, cellule inflammatoire caractéristique qui participe à la réponse immunitaire, et dans la pathogénèse de nombreuses maladies inflammatoires majeures. Le mastocyte peut libérer des médiateurs préstockés dans ses granules cytoplasmiques par dégranulation suite à la stimulation du récepteur de haute affinité pour les IgE (FceRI). Il sécrète aussi de nombreuses cytokines/chimiokines inflammatoires, induites spécifiquement après activation par le le FceRI ou sélectivement après stimulation LPS. Des nouvelles données ont montré des fonctions différentes et même opposées de ces classes de médiateurs. Notre objectif dans ce programme de recherche fondamental est de progresser dans la compréhension moléculaire et la définition fonctionnelle de la machinerie sécrétoire du mastocyte afin de définir de nouvelles cibles moléculaires pour une intervention thérapeutique et sélective. Dans la première tâche nous définirons les compartiments vésiculaires impliqués dans la sécrétion de médiateurs pré- et néoformés en caractérisant la fonction des protéines de fusion membranaires SNAREs, en particulier les protéines VAMP (Vesicular Associated Membrane Proteins) en utilisant des approches RNAi, KO et doubles KO ainsi que des approches biochimiques et de biologie cellulaire. Nous chercherons à établir un nouveau modèle de souris permettant l’expression de la chimiokine CCL2 à partir de son promoteur physiologique pour des études d’imagerie dynamique in vitro et in vivo permettant l’étude de son rôle dans des modèles de maladies inflammatoires. Basé sur des données préliminaires notre objectif est d'étudier la fonction de nouveaux effecteurs intervenant dans les mécanismes tardifs de signalisation et de la sécrétion. Un effecteur est la protéine Munc18-2, qui pourrait représenter un lien entre la machinerie de fusion SNARE et le cytosquelette de microtubules et donc les mécanismes de transport et d’attachement vésiculaire. Nous étudierons le rôle de la protéine tyrosine kinase Fyn impliquée dans le transport microtubululaire. Dans la deuxième tâche, nous examinerons comment les signaux du microenvironnement qui surgissent au cours d’un processus infectieux (LPS) dans un site fibrotique (TGFbeta) ou des drogues comme la morphine affectent cette machinerie moléculaire. Finalement, dans la troisième tâche nous utiliserons des modèles de souris deficient pour la sécrétion de médiateurs préformés (VAMP8-/- disponibles pour évaluer l’impact des classes de médiateurs dans le développement de deux maladies inflammatoires expérimentales mastocyte-dépendantes. Nous examinerons un modèle de cancer dans lequel les mastocytes ont montré à promouvoir l’angiogenèse et un modèle de glomérulonéphrite auto-immun.