– AURORA

La serine thréonine kinase Aurora-A joue un rôle clé au cours de la mitose. Bien que découverte en 1998, ses fonctions ne sont toujours pas bien connues. Son inhibition par RNA interférence conduit à un défaut dans la maturation des centrosomes qui entraîne la formation de fuseaux anormaux de microtubules pendant la mitose. Ce résultat est obtenu parce qu?il s?agit du premier évènement au cours du cycle cellulaire qui nécessite l?activité Aurora-A. La kinase est-elle requise pour les étapes tardives de la mitose? Pour la transition métaphase ? anaphase? Pour la sortie de mitose? Pour la cytocinèse? Répondre à ces questions n?est pas possible sans un inhibiteur spécifique de Aurora-A. Or il n?existe à l?heure actuelle aucun inhibiteur spécifique. Il n?est donc pas possible d?inhiber Aurora-A pendant des fenêtres très courtes au cours du développement. Nous avons contourné le problème et débuté un programme pour construire en collaboration avec Kevan Shokat (UCLA) une protéine Aurora-A génétiquement modifiée qui est sensible à un inhibiteur chimique qui ne possède aucune autre cible dans la cellule mais qui pénètre facilement et rapidement dans la cellule. Nous avons commencé à utiliser cette protéine Aurora A mutée en combinaison avec son inhibiteur spécifique. Nous avons validé cette kinase Aurora A génétiquement modifiée en utilisant une approche complexe ARNi/rescue et nous avons ainsi montré que l?activité Aurora A est encore requise après la métaphase. Cette approche ARNi/recue étant trop complexe à mettre en ?uvre nous avons décidé de construire une souris (Aurora-A PM/cKO) dont le gène Aurora A contiendrait les mutations ponctuelles qui rendent Aurora A sensible à un inhibiteur spécifique (NaPP1). Dès que nous obtiendrons cette souris nous pourrons plus directement répondre aux questions suivantes 1 - L?activité kinase de Aurora-A est-elle nécessaire à la maturation ovocytaire ? Il s?agit là d?une importante question qui n?a jamais obtenu de réponse claire depuis 1998. L?incubation des oocytes immatures de souris Aurora-A PM/cKO avec le NaPP1 permettra de répondre de manière directe. 2 - L?activité de Aurora-A est-elle nécessaire après la metaphase? Avec la souris Aurora-A PM/cKO nous aurons accès à des cellules MEFs qui ne contiendront que la kinase sensible au NaPP1. L?utilisation du NaPP1 sera couplé à la vidéo-microscopie. 3 ? Une inhibition très spécifique de Aurora-A est-elle une bonne stratégie pour lutter contre le cancer? Avec la souris Aurora-A PM/cKO nous aurons accès à un souris dans laquelle nous pourront estimer (i) les conséquences d?une inhibition de Aurora A dans un organisme entier (ii) induire des tumeurs et tester l?efficacité d?un inhibiteur de Aurora-A sur la regression tumorale. 4 ?Aurora-A est-elle un suppresseur de tumeur chez les mammifères comme chez la Drosophile chez qui la kinase est impliquée dans la division asymétrique. La souris cKO sera utilisée pour le tester. 5 ? mise au point d?une méthode pour purifier les substrats de Aurora-A.