Des bicouches suspendues pour l’étude de la cinétique et de l’organisation protéique dans la fusion membranaire médiée par les SNARE. – SuspenSNARE

La fusion membranaire induite par les protéines SNARE se retrouve à tous les niveaux dans le trafic intracellulaire. Cependant, les détails moléculaires de cette machinerie, tant au niveau de sa cinétique qu?à celui de sa régulation restent encore obscurs. Nous proposons, grâce à une collaboration entre deux équipes complémentaires de prendre une approche originale où les protéines SNARE transmembranaires sont insérées dans des bicouches suspendues afin de pouvoir disséquer et contrôler les évènements de fusion uniques par microscopie à onde évanescente (TIRF). Pour cela, nous mettrons en place une méthode complètement originale afin de suspendre des protéines transmembranaires au dessus d?un substrat. Nous avons déjà des résultats préliminaires montrant la faisabilité de cette technique qui pourra ensuite être utilisée par de nombreux autres chercheurs. Pour notre part, cette technique nous permettra de caractériser la cinétique d?association des SNARE, l?organisation de ces protéines avant la fusion, la cinétique et le rôle moléculaires de protéines de régulation : Synaptotagmine, Complexine et Munc18.