Régulation de CCL18 par les corticostéroïdes dans l'asthme sévère – CHEMOASTHMA

L'asthme est une maladie actuellement bien contrôlée par les corticostéroïdes (CS) inhalés, cependant une sous population d'asthme sévère reste symptomatique, en relation avec un remodelage bronchique important. CCL18 est une chimiokine exprimée de façon constitutive dans le poumon, inductible par les cytokines Th2, et qui possède des propriétés pro-fibrosantes. Nos précédents résultats montrent que CCL18 attire in vitro des lymphocytes Th2 et est augmentée dans le sérum de patients asthmatiques sévères traités par CS. Des résultats préliminaires montrent que les CS augmentent la production de CCL18 induite par l'IL-4 et l'IL-10 de monocytes mais pas de macrophages. Notre hypothèse est qu'une dysrégulation de CCL18 pourrait être associée avec certains phénotypes d'asthme sévère. Nos objectifs sont de déterminer les effets et les mécanismes d'action des CS sur la production de CCL18 en fonction de ces phénotypes, afin de définir son potentiel comme biomarqueur de l'asthme sévère.
1) Définir les effets des corticosteroïdes sur la production de CCL18 induite par l'IL-4 et l'IL-10 : Nous évaluerons in vitro l'influence des CS sur la production de CCL18 par les cellules mononuclées de patients en fonction de la sévérité de l'asthme, de la sensibilité aux CS, et du statut de différenciation cellulaire : monocytes représentatifs du compartiment circulant, versus les macrophages représentatifs du compartiment pulmonaire, qui semblent présenter d'après nos résultats préliminaires une régulation différente.
2) Déterminer les mécanismes d'action des CS sur la production de CCL18 induite par l'IL-4 et l'IL-10 : Nous déterminerons les mécanismes de régulation différentielle des CS sur la production de CCL18 induite par l'IL-4 et l'IL-10 dans les cellules monocytaires et macrophagiques. Les cinétiques et le traitement à la cycloheximide permettront d'évaluer si cet effet est direct. La part des régulations transcriptionnelle et post transcriptionnelle du gène CCL18 sera mesurée par traitement à l'actinomycine D et par run on. Le promoteur du gène CCL18 sera évalué par transfection transitoire, ainsi que par gel retard et immuno-précipitation de la chromatine. En cas de régulation post transcriptionnelle, les régions impliquées dans la stabilité de l'ARN CCL18 seront identifiées par des constructions synthétiques et gel retard.
3) Evaluer CCL18 comme biomarqueur potentiel d'asthme sévère : Une cohorte d'asthme sévère bien phénotypée sera évaluée pour son expression de CCL18 tant au niveau sérique circulant que bronchique (expectoration induite). Les niveaux de CCL18 observés seront corrélés avec différents paramètres cliniques, fonctionnels respiratoires et thérapeutiques. Par ailleurs l'expression de CCL18 sera évalué par immunohistochimie sur des biopsies bronchiques obtenues chez des sujets asthmatiques et corrélée aux paramètres de remodelage bronchique.
Les résultats attendus sont : 1) la mise en évidence de différences de régulation de la chimiokine CCL18 en fonction de l'environnement cytokinique (IL-4 versus IL-10), du compartiment impliqué (circulant versus pulmonaire) et de la différenciation cellulaire (monocytes versus macrophages) 2) l'élucidation des mécanismes d'action impliqués dans ces régulations différentielles 3) La définition de CCL18 comme un biomarqueur potentiel de certains phénotypes d'asthme sévère.
La mise en évidence d'un nouveau biomarqueur d'asthme sévère permettra d'améliorer le contrôle et la prise en charge de ces patients et à plus long terme pourrait constituer une nouvelle approche thérapeutique dans l'asthme.