CRMP5 marqueur des tumeurs neuroendocrines de haut grade dans le poumon: mise au point d'outils de détection de CRMP5 – CRMP/TNE

Le cancer du poumon est une des premières causes de mortalité par cancer chez l'homme et la troisième chez la femme. Dans 20 à 25% des cas, ces cancers correspondent à des carcinomes à petites cellules (CPC). Ces tumeurs très agressives sont souvent découvertes à un stade inopérable. Le diagnostic différentiel des CPC vis-à-vis des autres carcinomes pulmonaires au pronostic plus favorable n'est pas toujours simple; pourtant un diagnostic différentiel serait essentiel pour que les patients puissent bénéficier de schémas thérapeutiques adaptés. La découverte de CRMP5 comme cible auto-immune des CPC de patients atteints de Syndrome Neurologique Paranéoplasique a conduit à la recherche de CRMP5 dans les cancers du poumon. Alors que le poumon normal en est dépourvu, l'expression spécifique de CRMP5 dans les carcinomes pulmonaires agressifs (notamment les CPC) peut faire de CRMP5 un marqueur spécifique dont l'apport serait majeur dans le diagnostic différentiel des tumeurs du poumon.
L'objectif du projet est de mettre au point l'outil diagnostique (spécificité, fiabilité, sensibilité) de détection de CRMP5 (protéine ou ARN) sur tissu ou dans des cytoponctions transthoraciques ou ganglionnaires et après brossage ou aspiration lors d'une fibroscopie, ou encore dans des épanchement séreux tumoraux. Pour cela nous proposons selon les types d'isolats cliniques
1) de détecter la protéine à l'aide d'anticorps monospécifiques que nous produirons par vaccination aviaire avec de l'ADN nu codant pour CRMP5. Cette méthode originale permet d'obtenir à partir du jaune d'œuf de grandes quantités d'anticorps IgY spécifiques et biologiquement actifs (60-100 mg IgY purifiés/oeuf). Les anticorps IgY de structure différente des IgG de mammifères ont peu de cross-réactivité avec des sérums humains et le complément, ce qui est particulièrement précieux pour le développement de kits diagnostiques (immunomarquage, dot proteine)
2) de détecter des ARN messagers de CRMP5 par RT-PCR après simple ou double amplification des ARNm.
Tous les outils et modèles sont disponibles, la méthode la plus sensible et spécifique (protéine ou ARN) sera retenue en fonction des types de prélèvements (tissus, liquides biologiques). La détection de la protéine sera privilégiée sachant que les tests immunohistochimiques sont pratiqués en routine en milieu hospitalier. Mais si une détection par RT-PCR s'avérait optimale dans certains isolats, elle pourrait être envisagée en diagnostic précoce.
En sus de son rôle pour le diagnostic différentiel des carcinomes pulmonaires, la détection de CRMP5 pourrait aider au dépistage précoce des cancers du poumon. Si cette preuve de concept (détection de CRMP5 (ARNm/protéine) dans les tissus/liquides biologiques) aboutit, elle pourra donner les bases d'un test de dépistage dont l'intérêt en santé publique est lié à la fréquence du cancer et à sa gravité. Une détection précoce pourrait permettre une meilleure prise en charge et une amélioration de la médiane de survie qui est actuellement de 10 à 12 mois pour les carcinomes agressifs. Cette preuve de concept est protégée en amont par un brevet sur l'utilisation de CRMP5 dans le diagnostic du cancer. Il s'inscrit dans le cadre de la recherche clinique au sein d'un RTRS (NeuroDis) en région Rhône-Alpes.