– CSERFC

Le mecanisme de la traduction chez les eucaryotes est très complexe, en particulier en ce qui concerne l'étape de l'initiation, qui nécessite jusqu'à 9 facteurs d'initiation qui peuvent être une cible pour la régulation de l'expression des gènes. Au cours de l'initiation, la sous-unité ribosomale 40S contenant les facteurs d'initiation (eIF) 1, 1A, 2 et 3 se fixe à l'extrémité 5' du RNA messager, puis progresse jusqu'au codon d'initiation. L'extrémité 5' du RNAm est reconnue par les facteurs d'initiation 4A, 4B, 4E et 4F. L'adjonction ultérieure de la sous-unité 60S nécessite en outre les facteurs d'initiation 5 et 5B. Bien que tous les facteurs nécessaires à l'assemblage de ribosomes 80S susceptibles d'élongation aient été identifiés, et que leur rôle principal dans ce processus ait été déterminé, on ignore encore le mécanisme moléculaire des étapes même les plus fondamentales dans l'initiation, telles que la fixation puis la progression le long du RNAm. Cela est dû en grande partie à l'absence de structures de haute résolution de ribosome eucaryotique, ainsi que de modèles architecturaux de complexes d'initiation. Contrairement à l'initiation de la traduction dans la sous-unité 40S, certains virus utilisent des mécanismes distincts d'initiation par site d'entrée ribosomique interne ("internal ribosomal entry site" ou IRES). L'initiation IRES sur le virus de l'hépatite C est bien documentée: des complexes 43S ne contenant que eIF2 et eIF3 se lient directement au codon d'initiation du fait d'une interaction spécifique de IRES et de la sous-unité 40S. L'objectif principal du présent projet est l'obtention des données structurales rayons X nécessaires à une compréhension détaillée du mécanisme de la traduction eucaryotique, et en particulier de l'étape d'initiation. Les objectifs spécifiques de la recherche proposée comprennent: 1. la cristallisation de ribosomes 80S et de sous-unités 40S parallèlement de levure et d'embryons de poulets, en vue de la détermination de leur structure à moyenne et haute résolution; 2. la cristallisation et la détermination de la structure de complexes ribosomiques 80S et 40S avec des ligands fonctionnels (par exemple le RNAm et les RNAt); 3. la cristallisation et la détermination de la structure de complexes de ribosomes contenant de l'ARNm avec site d'entrée ribosomique interne (IRES). En résumé, ces expériences on pour but de fournir une base pour la compréhension de l'architecture moléculaire du ribosome eucaryotique et la mise au point d'une méthode pour une étude détaillée du mécanisme de l'initiation, l'étape la plus complexe de la traduction eucaryotique.