REGULATION DE L'HEMATOPOIESE PAR LE STROMA APPLICATION DU SYNDROME MYELOPROLIFERATIF – MYELOPOIESE

Les cellules sanguines sont produites tout au long de la vie par les cellules souches hématopoïétiques (CSH) et sont définies par leur capacité à reconstituer à long terme un hôte létalement irradié. Pendant la vie adulte, le principal site hématopoïétique est la moelle osseuse alors que pendant la période foetale, le foie soutient à la fois l'autorenouvellement et la différenciation des CSH. Ces processus sont régulés grâce à des interactions moléculaires avec les cellules stromales qui forment un microenvironnement spécial appelé niches hématopoïétiques. Le microenvironnement de la moelle osseuse est de plus en plus étudié tandis que son équivalent le foie foetal n'est pas encore très étudié. Il n'est toujours pas prouvé que les niches hématopoïétiques foetales qui permettent le maintien des CSH sont différentes de celles qui entraînent leur différentiation. Il a été observé que des CSH colonisent la rate foetale mais très peu de données sont à notre disposition concernant les capacités hématopoïétiques de cet organe. Nous avons démontré que les CSH qui colonisaient la rate foetale perdaient leur capacité d'autorenouvellement et que leur différenciation était restreinte au lignage macrophagique. Nous proposons d'étudier plus en détail les mécanismes qui permettent de distinguer un stroma capable de maintenir les CSH en état indifférencié d'un autre uniquement capable de soutenir leur différenciation. Nous examinerons d'abord si le maintien des CSH nécessite des contacts directs avec les cellules stromales ou si la sécrétion de molécules est suffisante. Nous utiliserons différentes conditions de culture pour les explants de rates foetales et examinerons si la population de CSH a pu proliférer et se maintenir ou si elle s'est différenciée. Dans cet environnement spécial qu'est la rate foetale, les CSH s'engagent vers la voie myéloïde pour produire des macrophages mais sont incapables de générer des lymphocytes. Notre objectif est d'identifier les évènements moléculaires mis en place par ce stroma pour bloquer la voie de différenciation lymphoïde. Pour cela, nous avons établi des lignées stromales de rate foetale sur lesquelles différents progéniteurs seront cultivés. Nous espérons ainsi identifier l'étape à laquelle s'opère ce blocage et mettre en évidence les éventuels facteurs de transcriptions cibles. Les lignées stromales que nous avons établies peuvent être séparées en deux groupes selon leur capacité à promouvoir la lymphopoïèse. Ainsi, des analyses comparant le transcriptome de ces lignées ont été réalisées par la technique des puces à ADN. La voie des TGFb semble impliquée et constituerait le principal régulateur. Plus spécifiquement, la protéine BMP4 (bone morphogenic protein) et son récepteur BMPR1 sont fortement surexprimés dans les lignées inhibant le lymphopoïèse. Leur implication sera étudiée grâce à différentes expériences d'inhibition (SiRNA ou antagonistes protéiques). Les myélofibroses sont des pathologies humaines où la dérégulation de l'hématopoïèse aboutit à une fibrose de la moelle osseuse et une hématopoïèse extra-médullaire dans la rate provoquant une augmentation de sa taille. La pathogenèse est toujours inconnue bien qu'un relarguage anormal de cytokines détériorant le stroma ainsi qu'une prolifération clonale des monocytes et des mégakaryocytes ont été décrit. Ces symptômes corrèlent avec nos résultats sur l'hématopoïèse splénique murine. Nos données concernant les évènements moléculaires qui limitent l'hématopoïèse dans la rate foetale à la production de monocytes peuvent aider à comprendre les dérèglements lors de la mise en place d'une hématopoïèse extramedullaire, c'est à dire dans la rate des patients atteints de MMM. Nous proposons d'analyser l'implication de la voie TGFb dans cette maladie. Nous voulons mesurer les taux de sécrétion des molécules BMP ainsi que l'expression de leur récepteurs sur les stroma pathologiques. Nous voulons récupérer des échantillons de stroma extramédullaire provenant de personnes atteintes de MMM et de personnes saines afin de caractériser leur phénotype et leur capacité à faire proliférer et à différencier des progéniteurs CD34+. La différenciation de progéniteurs de patients sera testée dans des conditions normales de différentiation en présence ou non d'antagonistes de la voie BMP et sur stroma extramédullaire. On définira ainsi si des déficiences existent au niveau des précurseurs hématopoïétiques et si leur destinée peut être influencée par le stroma pathologique. A partir du stroma de rate foetale de souris, nous avons isolé des facteurs sécrétés qui augmente très fortement la prolifération des monocytes. Ce qui pourrait être le cas également dans la pathologie MMM où la prolifération des cellules myéloïdes est très favorisée. Une banque de sérum de patients sera construite pour la comparer avec celle d'individus sains et avec les surnageants de cultures de cellules stromales de rate foetale.