– MicroTrac

Récemment, il a été découvert que l'ADN intronique ou intergénique de la plupart des eucaryotes code pour des molécules d'ARN partiellement complémenataires dont la forme maturée, après excision par l'enzyme Dicer, correspond à des ARNs de 21-24nt similaires aux 'short interfering (si) RNAs' produits expérimentalement au cours de l' interférence par ARN. Ces 'micro(mi)RNAs' sont partiellement ou entièrement complémentaires de la séquence de transcripts cellulaires qu'ils régulent négativement en inhibant leur traduction ou leur demi-vie. Bien que les miRNAs soient impliqués dans un nombre toujours croissant de processus biologiques essentiels chez les plantes et les animaux, notre connaissance des aspects les plus basiques de leur biologie demeure très modeste. Comment, où et quand les miRNAs sont-ils transcripts? Quelle est la base moléculaire de leur expression tissu-spécifique? Comment intéragissent-ils avec leurs cibles et quelle(s) machinerie(s ) cellulaires sous-tend(ent) leur activité répressive? Quelle est la fonction des grandes familles multigéniques controlées par miRNAs chez les plantes? Quelle est la dynamique du transcriptome des miRNAs et comment se relie-t-elle à l'orchestration , par ces molécules, de la régulation génétique à la base des programmes physiologiques et développementaux chez les plantes? Le projet qui est ici proposé vise à répondre à ces questions fondamentales dans la plante modèle Arabidopsis thaliana. Nous emploierons des outils et technologies disponibles dans le laboratoire du coordinateur afin d'investiguer la biologie de miR171, un miRNA qui dirige le clivage des membres de la famille de facteurs de transcription Scarecrow-like 6 (SCL6). Deux cribles génétiques complémentaires visant à identifier des mutants dans lesquelles la transcription ou l'activité de miR171 est altérée, seront menés en exploitant un set de plantes transgeniques exprimant une construction rapporteur de l'une ou l'autre de ces fonctions. De nouveaux gènes impliqués dans la transcription et l'activité repressive des miRNAs seront ensuite isolés par clonage positionnel systématique à grande échelle. Leurs produits seront ensuite caractérisés moléculairement. En parallèle, le promoteur de miR171 sera disséqué et ses élements régulateurs en Cis seront identifiés. Enfin, une puce à ADN representant 1200 loci de miRNAs putatifs et couvrant l'ensemble des ARN messagers d'Arabidopsis sera fabriquée de façon à optimiser la découverte de réseaux de régulation posttranscriptionelle impliqués dans la physiologie et le développement de la plante.. Le projet présenté apportera des données fondamentales concernant la biologie des miRNAs et facilitera l'exploitation de ces nouvelles molécules pour l'amélioration des plantes