– NO to OO

1- NO réductases (NORs) et oxydases (à hème/cuivre) font partie d'une famille commune d'enzymes. Tandisque les oxydases possèdent souvent une activité NO réductase, la plupart des NORs ne peuvent pas réduire l'oxygène. Nous avons identifié de possibles sites de mutations susceptibles de transformer une NO réductase en oxygène réductase. 2- Notre projet propose donc d'insérer un acide aminé crucial pour l'activité oxygène réductase dans la NOR de l'Aquificale thermophile Sulfurihydrogenibium azorense, suivi d'un travail de mutagénèse dirigée dans le but d'optimiser cette activité par la stabilisation préférentielle du cuivre par rapport au fer. A cette fin, la NOR de S. azorense NOR sera exprimée dans E. coli, mutée (par le groupe de Gif) et les mutants obtenus seront étudiés par des méthodes biochimiques et biophysiques à Marseille (activité enzymatique, caractérisation des cofacteurs par spectroscopies UV/Vis, EPR, CD, MCD, potentiels rédox par électrochimie). Les étapes de mutagénèse seront guidées par des comparaisons extensives de séquences et des prédictions de structure basées sur les trois structures 3D de cytochrome oxydases publiées à ce jour. 3- Les résultats obtenus donneront une meilleure compréhension des NO réductases en général, renseigneront sur la question du rapport évolutif entre la réduction du monoxyde d'azote et de l'oxygène et enfin éclaireront le débat concernant l'environement de la terre primordiale.