Identification des cellules cibles du facteur trophique RdCVF2 – RdCVF2

L'analyse des interactions entre les bâtonnets et les cônes dans les dégénérescences rétiniennes héréditaires a conduit à l'identification d'un nouveau facteur trophique (« Rod-derived cone viability factor », RdCVF), produit d'un épissage alternatif du gène Txnl6, homologue à la famille des thioredoxines (Léveillard et coll., 2004). RdCVF est spécifiquement exprimé par les cellules photoréceptrices de la rétine et pas par d'autres tissus. La dégénérescence des bâtonnets (97% des photorécepteurs) chez la souris rd1, un modèle de rétinopathie pigmentaire (RP) entraîne une diminution de l'expression de RdCVF et la dégénérescence secondaire des cônes par perte de support trophique. Des expériences d'immunodéplétion indiquent que RdCVF est une composante essentielle de l'interaction des bâtonnets vers les cônes. L'identification de RdCVF permet de proposer une approche thérapeutique logique et potentiellement large puisque indépendante de l'anomalie génétique portée par les bâtonnets. Les cônes sont en fait essentiels pour la vision. Par une analyse bioinformatique nous avons identifié un paralogue de RdCVF, RdCVF2. RdCVF2 peut aussi améliorer de manière significative la survie des cônes. Il y a conservation phylogénique de RdCVF et du nouveau gène RdCVF2 chez tous les métazoaires possédant un oeil aqueux. L'organisation génique particulière des deux gènes a été maintenue par l'évolution, ce qui prédit l'existence d'une isoforme courte de la protéine avec une troncation dans le domaine thioredoxine. A la différence de RdCVF, l'expression RdCVF2 n'est pas limitée à la rétine mais a été détectée dans le cerveau et plus spécifiquement dans le cervelet de la souris. Etant donné la conservation dans l'ordre et l'organisation génique nous proposons que la famille de RdCVF soit impliquée dans le maintien de la viabilité des cellules neuronales et probablement d'autres cellules de l'organisme. Ce projet vise à identifier ces cellules cibles de RdCVF2 en dehors de la rétine. Les objectifs spécifiques sont les suivants:

Objectif 1: Profile d'expression de RdCVF2
A. Profile d'expression de RdCVF2 durant l'embryogenèse chez la souris
B. Profile d'expression de RdCVF2 dans les organes de la souris adulte

Objectif 2 : Caractérisation du phénotype des souris RdCVF2 -/-
A. Génération des souris RdCVF2 -/-
B. Analyse de la fonction des organes de la souris RdCVF2 -/-
C. Analyse du phénotype comportemental des souris RdCVF2 -/-
D. Analyse de la perte putative de cellules chez la souris RdCVF2 -/-

Objectif 3: Evaluation in vitro.de l'activité trophique de RdCVF2 sur les cellules cibles identifiées
A. Développement des modèles de mort cellulaire appropriés
B. Test de l'activité trophique de RDCVF2 sur ces modèles

Objectif 4: Evaluation in vivo de l'activité trophique de RdCVF2 sur les cellules cibles identifiées
A. Construction/validation de vecteurs viraux pour RdCVF2
B. Essais des vecteurs RdCVF2 par injection dans l'oeil de la souris rd1 et RdCVF2 -/-