Preuve de concept d'une thérapie locale à base de protéoliposomes contre les infections pulmonaires aigues des patients atteints de granulomatose septique chronique – PROLIC

La granulomatose septique chronique (CGD) est une maladie génétique rare de l'immunodéficience innée affectant les phagocytes (neutrophiles, macrophages) des patients par dysfonctionnement du complexe membranaire NADPH oxydase. Cet enzyme est responsable de la production de dérivés toxiques de l'oxygène (ROS) microbicides. La forme génétique la plus fréquente est la CGD liée à l'X (CGDX) affectant l'élément redox NOX2/p22phox du complexe NADPH oxydase. Ainsi les patients souffrent d'infections graves et récidivantes, la première cause de décès étant l'infection pulmonaire aiguë réfractaire aux traitements anti-infectieux intraveineux. Seule une infusion de granulocytes pour "booster" leur immunité défectueuse peut les sauver mais cela compromet fortement une éventuelle greffe de moelle allogénique ultérieure et ce traitement est difficile à organiser en urgence. Ainsi un traitement local appliqué en urgence a toute sa place. L'objectif principal de ce projet est de faire la preuve de concept de l'efficacité d'une thérapie locale à base de protéoliposomes NOX2/p22phox dans des modèles expérimentaux d'infections pulmonaires aiguës, dans un contexte de CGD.
Le complexe membranaire recombinant NOX2/p22phox sera généré par expression dans des cellules HEK293 TRex après infection lentivirale. La purification se fera par affinité grâce à l'ajout d'un tag à la construction plasmidique. les PLs seront constitués par un mélange lipidique contenant de la phosphocholine-azido permettant de lier par chimie "click" des molécules pour leur ciblage spécifique au niveau des macrophages pulmonaires. La preuve de concept de l'efficacité des PLs natifs ou modifiés se fera par analyse de la restauration de l'activité NADPH oxydase dans des modèles cellulaires déficients en NOX2/p22phox comme des macrophages CGDX issus de cellules pluripotentes induites de patients. Finalement l'efficacité des PLs optimisés sera testée dans un modèle d'infection pulmonaire aiguë chez la souris CGDX.