Mécanismes sous-jacents à l'activation endosomale de l'inflammasome NLRP3 – ENDOFLAMMASOME

L'inflammasome est un complexe multiprotéique intracellulaire qui détecte les lésions tissulaires stériles et les agents infectieux. Différents types d’inflammasomes existent, dotés chacun de molécules de détection spécifiques. Sa capacité à détecter de multiples signaux de stress cellulaire rend l'inflammasome NLRP3 unique. Mais ce mécanisme de détection commun qui entraine l’assemblage de l'inflammasome NLRP3 reste mal défini. Une idée émergente dans le domaine suggère que l'inflammasome NLRP3 est recruté et activé au niveau des endomembranes. Nous avons été les premiers à démontrer que NLRP3 se localise dans des vésicules avant l'assemblage de l'inflammasome. Plus récemment, nous avons caractérisé ces vésicules et montré qu'il s'agit d'endosomes enrichis en phosphoinositol-4-phospate (PI4P). De plus, nous avons découvert que l'accumulation de PI4P sur les endosomes résulte principalement de la rupture des sites de contact endosome-réticulum endoplasmique (SCER) en réponse aux activateurs de l'inflammasome NLRP3. Les objectifs de ce projet sont (1) de comprendre comment les activateurs de NLRP3 perturbent les SCER et (2) de disséquer le mécanisme qui est à la base de l'activation de NLRP3 aux endosomes. Pour identifier les mécanismes sous-jacents à leur rupture, nous réaliserons un criblage cellulaire basé sur CRISPR Cas9 en monitorant l’intégrité des SCER. Nous caractériserons aussi en détail les changements dans le compartiment endosomal en utilisant une combinaison d'approches de pointe, notamment la purification endosomale, la lipidomique/protéomique et les essais de reconstitution in vitro à base de liposomes et les analyserons fonctionnellement. A cette fin, nous avons mis en place une collaboration impliquant les laboratoires du Dr. B. Antonny à l'IPMC de Nice et du Dr. B. Payrastre à l'i2MC de Toulouse. L'activité de recherche proposée va clairement au-delà de ce qui est déjà connu et ouvrira de nouveaux champs thérapeutiques pour le futur.