Thérapie génique de la fibrose hépatique : Ablation ciblée de fibroblastes portaux – LIVES

La fibrose, notamment la fibrose hépatique, est un enjeu de santé majeur. Détruire les myofibroblastes (MFs), principaux effecteurs de la fibrose, est une stratégie anti-fibrosante récemment apparue, particulièrement innovante. Dans la fibrose hépatique, les MFs dérivent en majorité des cellules étoilées (HSCs) mais également des fibroblastes portaux. Les partenaires 1&2 ont développé en collaboration l’analyse par scRNAseq des cellules mésenchymateuses du foie et ont ainsi identifié des fibroblastes portaux ayant les caractéristiques de cellules souches mésenchymateuses (PMSCs), à l’origine de MFs (PMSC-MFs) caractérisés par une prolifération intense et des fonctions pro-angiogéniques (Lei et al., Hepatology 2022, DOI: 10.1002/hep.32456). Notre postulat est que les PMSC-MFs induisent la progression de la fibrose et qu'il serait avantageux de les détruire pour les sujets ayant une fibrose à un stade avancé, plutôt que les MFs dérivés des HSCs (HSC-MFs), qui sont impliqués dans la régénération. Le but du projet est de développer un protocole préclinique de thérapie génique anti-fibrosante via l’élimination des PMSC-MFs (ou de tous les MFs hépatiques pour comparaison) dans la fibrose hépatique. A partir de nos données RNAseq, Asfalia Biologics, une start-up développant des stratégies sécurisées de thérapie génique basée sur le contrôle temporal de l’expression du transgène (Partenaire 3), a entrepris la production d’outils pour le ciblage du gène suicide conditionnel iCaspase9 (iCasp9), dans les PMSC-MFs (ou par comparaison dans tous les MFs hépatiques). Par scRNAseq et microRNAseq, nous caractériserons le transcriptome des PMSCs/PMSC-MFs et autres MFs dans la fibrose hépatique murine. Les promoteurs des gènes sélectionnés seront analysés par ATAC-seq puis clonés dans des vecteurs lentiviraux pour vérifier leur expression spécifique dans les PMSC-MFs ou tous les MFs hépatiques. In fine, le gène suicide iCasp9 et le gène rapporteur iRFP seront ciblés dans les PMSC-MFs ou tous les MFs du foie fibrotique de souris à l'aide d'un vecteur AAV6. L'expression des transgènes sera restreinte aux PMSC-MFs ou à tous les MFs par le tropisme du vecteur, le contrôle transcriptionnel, et l’inactivation post-transcriptionnelle. Nous évaluerons l’impact de l’ablation de ces cellules sur la fibrose hépatique, ainsi que sur l'angiogenèse et la régénération. Cibler une sous-population cellulaire spécifique, au rôle clé dans la progression de la fibrose, par une nouvelle thérapie génique, sera une avancée technologique et biomédicale majeure.