Lésions oxydatives tandem de l’ADN, formation réparation et mutagénèse – TODNAL

Les dommages de l'ADN sont continuellement créés au sein du génome par le stress oxydant qui est impliqué ou associé à de nombreuses pathologies humaines. Les espèces réactives de l?oxygène produites peuvent endommager les constituants cellulaires et notamment l?ADN dont l?intégrité est nécessaire au maintien de l?information génétique. Ce maintien est assuré par des systèmes de réparation qui sont chargés d?éliminer ces lésions. En ce qui concerne les lésions oxydatives, le système de réparation par excision de base (BER) est le plus impliqué. Malgré les efforts effectués ces dernières décennies pour mieux comprendre les mécanismes moléculaires de formation des lésions et l?impact de leur présence, des résultats récents suggèrent que des lésions dites tandem, où deux (ou plus) modifications de l?ADN contigües sont générées, peuvent être produites par un seul évènement radicalaire. Des résultats préliminaires indiquent également que ces lésions sont beaucoup moins bien réparées par le BER que les lésions isolées. Le projet vise dont à étudier la formation de ces lésions tandem, à déterminer l?efficacité des glycosylases impliquées dans le BER à les exciser, à comprendre d?un point de vue structural pourquoi cette efficacité est affectée et enfin à déterminer leur pouvoir mutagène. La formation de ces lésions issues d?un seul évènement radicalaire sera étudiée en utilisant inséré au sein d?un oligonucléotide un générateur photochimique d?un radical. Les produits issus de cette photolyse seront analysés par diverses approches physicochimiques afin de déterminer la nature et la quantité des lésions tandem produites. Les lésions tandem seront ensuite incorporées au sein d?oligonucléotides qui seront utilisés pour des études de réparation par des glycosylases et extraits cellulaires. En parallèle, des analyses structurales seront entreprises afin de comprendre comment la présence de lésions tandem peut affecter l?efficacité des glycosylases. Enfin, la mutagénicité de ces lésions sera déterminé après transfection dans des cellules. Ces travaux de recherche fondamentale visent à mieux comprendre les conséquences biologiques de ces lésions tandem. Ces connaissances sont nécessaires pour envisager des stratégies pour minimiser l?impact de ces lésions complexes ou au contraire profiter de leur nocivité afin d?optimiser des traitements à but thérapeutique.