– IMATHABIO

Objectifs: L'athérosclérose est une pathologie inflammatoire avec formation de plaques d'athérome à risque de rupture. Le concept récent que ce risque soit lié au contenu de la plaque et non à sa taille se traduit par un nouvel impératif d'imagerie. De fait, les études actuelles s'orientent vers la possibilité d'un diagnostic non invasif par un ciblage par IRM (Imagerie par Résonance Magnétique) ou SPECT (Single Photon Emission Computed Tomography) de molécules biologiques impliquées dans les plaques d'athérome vulnérables. Afin d'établir une preuve de principe sur la possibilité de visualiser précocément la vulnérabilité d'une plaque, notre objectif est de développer des fragments d'anticorps monoclonaux (AcM) humains (scFv, Fab'2) ou AcM entiers. Ces anticorps recombinants non-immunogènes secondairement couplés à des particules superparamagnétiques ou des radioisotopes seront susceptibles de révéler les cibles cellulaires et moléculaires sur-exprimées sur les plaques vulnérables et d'identifier in vivo des biomarqueurs de l'athérosclérose. Des études antérieures ont montré la pertinence du phage display in vivo dans l'obtention de peptides « ciblant » le système vasculaire dans divers modèles pathologiques. Le partenaire 1 est le seul laboratoire sur le plan international à maîtriser parfaitement le phage display in vivo pour l'obtention d'anticorps monoclonaux humains. Son expertise concerne l'obtention rapide de phage-anticorps humains après sélection chez l'animal athéromateux. L'objectif commun des différents partenaires est de développer le concept d'imagerie moléculaire de l'athérosclérose à l'aide de ces bioagents intelligents. Description du projet: La première étape est l'obtention d'AcM humains ciblant les biomarqueurs de l'athérosclérose. Son absence d'immunogénicité, sa grande spécificité et la possibilité d'obtenir différents formats du même anticorps définissent l'AcM humain comme un agent ciblant de choix. La méthodologie choisie (phage-display) est la sélection de phage-Acs sur des cibles spécifiques à partir de banques combinatoires de fragments scFv d'anticorps humains. Le coordinateur du projet (G.Clofent-Sanchez :UMR 5536), expert dans ce domaine, a sélectionné des phages-Ac humains recombinants dirigés contre l'intégrine aIIbb3, responsable du développement de la pathologie et des complications thrombotiques. Afin d'identifier de nouveaux marqueurs précoces de l'athérosclérose, le partenaire 1 a développé une technique de sélection d'AcM recombinants spécifiques de protéines sur-exprimées au sein de plaques d'athérome sur un modèle animal d'athérosclérose (phage-display in vivo). L'expression des AcM dans E. Coli sous format scFv ou dans le système Baculovirus/cellules d'insectes sous formats IgG ou Fab'2 sera suivie de leur production et purification menées à façon au sein de l'ESTBB (Ecole Supérieure de Technologie des Biomolécules de Bordeaux: X. Santarelli)). L'ingénierie « BaculoMab », nouvelle technologie brevetée par le partenaire 2 (M.Cérutti :UPS 3044) est dédiée à la production d'AcM humains en vue d'applications thérapeutiques. Le succès de cette technologie repose sur le rendement, le faible coût, l'universalité et la sécurité sanitaire. Des bio-pharmaceutiques pour l'immunociblage de la plaque d'athérome seront développés par les partenaires 3 et 4 (E.Duguet :UPR9048 et R.Pasqualini :CISbio international) à partir des AcM ou mini-anticorps purifiés. La technique de marquage des AcM à des radiotraceurs est une technique éprouvée de CISbio international. Un marquage à l'I125 permettrait de sélectionner les AcM ou fragments d'AcM humains avec des affinités et des clairances appropriées pour une utilisation ultérieure en SPECT (après marquage au 99mTc) ou en IRM. Cette technique d'imagerie, peu sensible, nécessite un ciblage optimum de façon à diminuer les quantités d'agents de contraste injectées. Ces agents de contraste sont des VUSPIOs pour « Versatile UltraSmall SuperParamagnetic Iron Oxide